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00:00:00,15 --> 00:00:05,11
在本视频中，我们将为您展示如何使用FLUOVIEW FV3000软件


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00:00:05,11 --> 00:00:09,03
进行光谱拆分。光谱拆分是一个特别适合

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00:00:09,03 --> 00:00:12,13
去除荧光重叠信号的工具。

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00:00:12,13 --> 00:00:16,04
举个例子，这是使用Brainbow标记的浦肯野细胞组织切片

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00:00:16,04 --> 00:00:19,20
的原始三维光谱序列图像。

6
00:00:19,20 --> 00:00:23,10
利用Analysis分析工具窗口，我们可以轻松选择

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00:00:23,10 --> 00:00:27,23
用于光谱序列图像的
多种光谱拆分算法。

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00:00:27,23 --> 00:00:32,06
双击”Mode Selection”即可查看可用算法。

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00:00:32,06 --> 00:00:35,14
盲拆分”Blind Unmixing”会是一个很好的开始。

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00:00:35,14 --> 00:00:42,07
对于Z轴序列，可输入想要作为分析基础
的Z层面编号。

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00:00:42,07 --> 00:00:47,08
然后输入样本标记的荧光信号数量，

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00:00:47,08 --> 00:00:50,08
选择“Process”即可显示出拆分结果。

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00:00:50,08 --> 00:00:52,22
这组图设置了4种荧光盲拆分，

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00:00:52,22 --> 00:00:57,15
光谱拆分后，每个Z平面也得到了4个荧光通道的图像。

15
00:00:57,15 --> 00:01:04,15
光谱拆分展示了Z轴上特有的信号分布。

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00:01:04,15 --> 00:01:09,17
也自动生成各通道的发射光光谱分布图。

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00:01:09,17 --> 00:01:13,05
光谱图像拆分“Spectral Image Unmixing”模式只需通过简单的设置，

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00:01:13,05 --> 00:01:17,01
即可让您通过定义特异区域进行光谱拆分。

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00:01:17,01 --> 00:01:20,17
在这个新例子中，我们可以看到荧光校准小球

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00:01:20,17 --> 00:01:23,14
的高分辨率光谱扫描。

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00:01:23,14 --> 00:01:26,21
首先，选择“ Spectral Image Unmixing”光谱拆分模式。

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00:01:26,21 --> 00:01:31,09
使用分析工具栏定义感兴趣区域（ROI），

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00:01:31,09 --> 00:01:34,13
标记具有特异光谱数据的区域。

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00:01:34,13 --> 00:01:39,19
对于不同荧光标记的特异性位置，
分别定义不同的ROI。

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00:01:39,19 --> 00:01:50,07
再调整ROI大小，尽量提高采样像素的均匀度。

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00:01:50,07 --> 00:01:54,12
需要选择第一个ROI所在的图像文件名。

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00:01:54,12 --> 00:01:58,10
同样的，其它ROI也需要指定对应的图像名称，

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00:01:58,10 --> 00:02:02,03
这样可以很轻松地处理作为对照组的荧光单标图像。

29
00:02:02,03 --> 00:02:06,03
处理结果将以光谱拆分通道呈现。

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00:02:06,03 --> 00:02:11,15
在这里，我们可以很清楚地区分
荧光小球外壳和内核的光谱信息在空间上的分布。

31
00:02:11,15 --> 00:02:15,06
即使这两种校准染料的发射峰值只有14nm的差异，

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00:02:15,06 --> 00:02:18,11
使用这个方法也很容易把它们拆分。

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00:02:18,11 --> 00:02:22,10
常规拆分”Normal Unmixing”模式使用已保存的发射光谱曲线，


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00:02:22,10 --> 00:02:26,11
让重复性实验中的光谱拆分变得更简单。

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00:02:26,11 --> 00:02:33,10
比如，我们可以获得苏木精-伊红染色组织切片
的光谱扫描曲线。

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00:02:33,10 --> 00:02:36,18
从这组图像中，我们可以生成可用于后续实验

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00:02:36,18 --> 00:02:39,21
的发射光谱曲线。

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00:02:39,21 --> 00:02:45,05
首先，我们需要通过执行光谱拆分
获取发射光谱曲线。

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00:02:45,05 --> 00:02:47,22
接下来，我们将采用双通道的盲拆分。

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00:02:47,22 --> 00:02:54,01
选择“另存为（Save As）”导出包含
每个波长对应归一化荧光强度的文件。

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00:02:54,01 --> 00:02:57,20
点击“浏览（browse）”选择保存位置。

42
00:02:57,20 --> 00:03:08,17
请确保仅选中“测量（measurement）”、“波长（wavelength）”
和“标准化强度（normalized intensity）”。

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00:03:08,17 --> 00:03:12,11
从工具窗口中选择“染料编辑器（Dye Editor）”。

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00:03:12,11 --> 00:03:16,22
点击“新染料（new dye）”按钮上传发射光谱曲线。

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00:03:16,22 --> 00:03:28,18
输入相应的染料名称和参数。

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00:03:28,18 --> 00:03:33,16
通过选择文件导入已经保存的发射光谱曲线。

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00:03:33,16 --> 00:03:37,04
输入适当的观察参数。

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00:03:37,04 --> 00:03:49,07
对其他编号的染料重复上述步骤。

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00:03:49,07 --> 00:04:01,17
使用相同设置采集的图像数据
可以通过Normal Unmixing模式进行快速拆分。

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00:04:01,17 --> 00:04:12,18
从下拉列表中选择已保存的染料信息。

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00:04:12,18 --> 00:04:17,20
正如这些例子所示，FV3000分析软件可以为图像提供

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00:04:17,20 --> 00:04:24,02
快速、精准
和便捷的光谱拆分。

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00:04:24,02 --> 00:04:27,02
欲了解有关FLUOVIEW FV3000的更多信息

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00:04:27,02 --> 00:04:34,09
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