1
00:00:00,627 --> 00:00:05,465
A través de este video, se mostrará cómo usar el software FLUOVIEW® FV3000

2
00:00:05,465 --> 00:00:09,135
con la deconvolución espectral: una herramienta muy útil

3
00:00:09,135 --> 00:00:12,555
para separar las señales de emisión superpuestas.

4
00:00:12,555 --> 00:00:16,350
Por ejemplo, visualice esta imagen de configuración lambda 3D sin procesar

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00:00:16,350 --> 00:00:19,853
perteneciente a una sección de tejido dotada de células
de Purkinje marcadas por arco iris neural.

6
00:00:19,853 --> 00:00:23,442
En la ventana del menú Analysis tool, podemos seleccionar fácilmente

7
00:00:23,442 --> 00:00:28,153
múltiples algoritmos de deconvolución espectral
para aplicarlos en la imagen lambda.

8
00:00:28,153 --> 00:00:32,283
Haga doble clic en las opciones de Mode para
ver los algoritmos disponibles.

9
00:00:32,283 --> 00:00:35,620
La opción Blind unmixing es un buen punto para iniciar.

10
00:00:35,620 --> 00:00:42,502
Si generó un apilamiento en Z, ingrese el número del plano Z
en el que desea basar el análisis.

11
00:00:42,502 --> 00:00:47,382
A continuación, hay que seleccionar la cantidad probable
de señales que posee la muestra.

12
00:00:47,382 --> 00:00:50,385
Seleccione el botón Process para visualizar el resultado.

13
00:00:50,385 --> 00:00:52,970
Por una suposición de valor 4 para este conjunto de datos,

14
00:00:52,970 --> 00:00:57,850
se obtiene cuatro canales distintos aplicables a cada plano Z.

15
00:00:57,850 --> 00:01:04,690
La separación espectral demuestra las distribuciones
de señales distintas sobre el eje Z.

16
00:01:04,690 --> 00:01:09,778
Se generará de forma automática un gráfico
que representa el perfil de emisión de cada canal.

17
00:01:09,778 --> 00:01:13,282
Con pocos datos, el modo de separación espectral en la imagen

18
00:01:13,282 --> 00:01:17,120
le permite determinar la línea guía para el algoritmo de deconvolución.

19
00:01:17,120 --> 00:01:20,790
En este nuevo ejemplo, se ve un escaneo lambda de alta resolución

20
00:01:20,790 --> 00:01:23,668
de esferas de calibración marcadas con fluorescencia.

21
00:01:23,668 --> 00:01:27,130
Primero, seleccione la separación espectral como su modo.

22
00:01:27,130 --> 00:01:31,467
Utilice la barra de herramientas analíticas para definir
la región de interés (ROI),

23
00:01:31,467 --> 00:01:34,637
que además muestra perfiles lambda excepcionales.

24
00:01:34,637 --> 00:01:40,058
Sitúe el área de interés que definirá los píxeles característicos
para cada una de las señales previstas.

25
00:01:40,058 --> 00:01:50,403
Después, determine la dimensión del área de interés
para maximizar la uniformidad de los píxeles de muestreo.

26
00:01:50,403 --> 00:01:54,615
Para la primera área de interés, seleccione el nombre del archivo
en que fue configurada.

27
00:01:54,615 --> 00:01:58,537
Cualquier área de interés adicional, extraída,
también se define por el nombre del archivo

28
00:01:58,537 --> 00:02:02,415
para facilitar el manejo de imágenes de control con un solo marcado.

29
00:02:02,415 --> 00:02:06,252
Los resultados procesados son proporcionados como canales
sin separación espectral.

30
00:02:06,252 --> 00:02:11,925
Aquí, se puede ver una separación espectral espacial
clara y completa del revestimiento de la esfera y el núcleo.

31
00:02:11,925 --> 00:02:15,387
Tan solo con una diferencia de 14 nanómetros
entre los niveles máximos de emisión,

32
00:02:15,387 --> 00:02:18,765
las dos tinciones de calibración se separan fácilmente.

33
00:02:18,765 --> 00:02:22,560
La separación normal simplifica su flujo de trabajo
para experimentos repetidos

34
00:02:22,560 --> 00:02:26,605
al guardar un perfil de emisión derivado experimentalmente.

35
00:02:26,605 --> 00:02:33,572
Por ejemplo, se puede adquirir una representación lambda
de una sección de tejido teñida con hematoxilina-eosina.

36
00:02:33,572 --> 00:02:36,908
A partir de este conjunto de datos, se puede generar un perfil de emisión

37
00:02:36,908 --> 00:02:40,035
útil para futuros experimentos.

38
00:02:40,035 --> 00:02:45,375
Primero, se necesita generar un perfil de emisión
al aplicar un proceso de deconvolución espectral.

39
00:02:45,375 --> 00:02:48,085
Aquí, se usará el valor dos para el parámetro Blind.

40
00:02:48,085 --> 00:02:54,217
Seleccione «Save as» para exportar un archivo que contenga
la intensidad normalizada por longitud de onda.

41
00:02:54,217 --> 00:02:58,012
Seleccione una ubicación adecuada mediante el botón «Browse».

42
00:02:58,012 --> 00:03:08,898
Asegúrese de que solo los parámetros Measurement, WaveLeght
e Normalized Intensity sean seleccionados.

43
00:03:08,898 --> 00:03:12,652
Seleccione la opción Dye Editor en el menú Tools.

44
00:03:12,652 --> 00:03:17,115
Seleccione el botón New dye para cargar el perfil de emisión.

45
00:03:17,115 --> 00:03:28,960
Introduzca el nombre y los valores deseados para el tinte.

46
00:03:28,960 --> 00:03:33,882
Importe el perfil de emisión guardado al seleccionar el archivo.

47
00:03:33,882 --> 00:03:37,385
Introduzca los parámetros de observación apropiados.

48
00:03:37,385 --> 00:03:49,522
Repita estos pasos para la cantidad de tintes utilizados.

49
00:03:49,522 --> 00:04:02,118
Al usar los mismos parámetros de imagen, los datos adquiridos
pueden ser separados con rapidez estando en el modo normal.

50
00:04:02,118 --> 00:04:13,003
Seleccione el perfil de tinte que ha sido guardado a partir
de la lista desplegable.

51
00:04:13,003 --> 00:04:18,092
Tal y como ha sido ejemplarizado, el software de análisis
FV3000 proporciona

52
00:04:18,092 --> 00:04:24,348
resultados rápidos y precisos, y flujos de trabajo convenientes
para separar de forma espectral sus imágenes.

53
00:04:24,348 --> 00:04:27,352
Para obtener más información acerca de FLUOVIEW FV3000

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00:04:27,350 --> 00:04:34,648
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