1
00:00:05,047 --> 00:00:11,177
Voici la 3e partie de notre série de vidéos sur
l’utilisation de l’outil Well Plate Navigator de cellSens.

2
00:00:11,177 --> 00:00:17,808
Je vais expliquer comment regrouper des puits
et attribuer des conditions d’observation à chaque groupe.

3
00:00:17,808 --> 00:00:22,188
Reportez-vous à la première vidéo pour connaître
les étapes de préparation, et à la deuxième

4
00:00:22,188 --> 00:00:26,943
pour connaître la procédure d’acquisition
d’images de base de la plaque multipuits.

5
00:00:26,943 --> 00:00:30,447
Je vous montrerai tout d’abord comment
regrouper et organiser les puits.

6
00:00:30,447 --> 00:00:33,492
Voici ceux qui ont été sauvegardés dans la deuxième vidéo.

7
00:00:33,492 --> 00:00:36,912
Cliquez sur le bouton « Add a comment to the selected well ».

8
00:00:36,912 --> 00:00:41,040
Cliquez sur le bouton gauche de votre souris et faites
glisser le curseur sur les puits pour les sélectionner.

9
00:00:41,040 --> 00:00:45,712
Vous pouvez ensuite saisir un commentaire,
par exemple le nom ou la concentration du fluorophore.

10
00:00:45,712 --> 00:00:49,632
Sélectionnez votre couleur de surlignage préférée,
puis cliquez sur « OK ».

11
00:00:49,632 --> 00:01:04,188
Répétez les mêmes étapes pour le reste des puits.

12
00:01:04,188 --> 00:01:10,028
Il est utile de regrouper les puits par
type de fluorophore, type de cellule ou état des cellules.

13
00:01:10,028 --> 00:01:14,240
Ensuite, ouvrez le volet « Experiment Manager »
et cliquez sur « New ».

14
00:01:14,240 --> 00:01:17,868
Dans la fenêtre « Experiment », planifiez
des expériences complexes

15
00:01:17,868 --> 00:01:20,747
simplement en faisant glisser et en déposant des commandes.

16
00:01:20,747 --> 00:01:24,708
Je vais assigner différentes conditions
d’observation à chaque groupe.

17
00:01:24,708 --> 00:01:30,798
Sélectionnez une méthode d’observation, par exemple
« DAPI » dans la liste de commandes « Image Acquisition ».

18
00:01:30,798 --> 00:01:34,052
Puis cliquez n’importe où dans la fenêtre « Experiment ».

19
00:01:34,052 --> 00:01:37,638
Tracez une boucle de platine autour de la commande DAPI.

20
00:01:37,638 --> 00:01:43,478
Faites ensuite glisser la platine vers n’importe quel puits
du groupe DAPI dans l’outil Well Plate Navigator.

21
00:01:43,478 --> 00:02:10,088
Cliquez sur la commande DAPI, puis sur le bouton « Live »
pour régler la mise au point et le temps d’exposition.

22
00:02:10,088 --> 00:02:14,883
Cliquez sur « Get Settings » pour enregistrer le temps
d’exposition dans le gestionnaire d’expériences.

23
00:02:14,883 --> 00:02:18,722
Cliquez de nouveau sur « Live » pour le désactiver.

24
00:02:18,722 --> 00:02:24,060
Cliquez sur la commande de création de boucles de platine,
puis sélectionnez DAPI dans la liste « Position Group »

25
00:02:24,060 --> 00:02:30,150
afin que seuls les puits appartenant au groupe DAPI
soient acquis avec les paramètres d’observation DAPI.

26
00:02:30,150 --> 00:02:42,662
Sélectionnez, puis copiez et collez les commandes
dans la fenêtre « Experiment ».

27
00:02:42,662 --> 00:02:53,548
Cliquez sur la commande DAPI, puis remplacez la méthode
par « RFP » dans « Observation Method ».

28
00:02:53,548 --> 00:03:00,097
Cliquez sur « Apply Settings », puis sur « Live ».

29
00:03:00,097 --> 00:03:04,058
Déplacez la platine vers n’importe quel puits du groupe RFP.

30
00:03:04,058 --> 00:03:18,448
Ajustez le temps d’exposition, puis cliquez sur
« Get Settings » pour l’enregistrer.

31
00:03:18,448 --> 00:03:21,033
Cliquez ensuite à nouveau sur « Live ».

32
00:03:21,033 --> 00:03:26,372
Cliquez sur la commande de création de boucles de platine
pour RFP, puis remplacez « Position Group » par RFP

33
00:03:26,372 --> 00:03:32,545
afin que seuls les puits appartenant au groupe RFP
soient acquis avec les paramètres d’observation RFP.

34
00:03:32,545 --> 00:03:39,468
Nous avons assigné différentes conditions d’observation
aux puits selon leur groupe.

35
00:03:39,468 --> 00:03:43,013
Ce symbole d’avertissement jaune apparaît
dans la fenêtre « Experiment »

36
00:03:43,013 --> 00:03:47,352
pour vous signaler toute erreur
dans les paramètres de l’expérience.

37
00:03:47,352 --> 00:03:51,647
Le message d’erreur indique que
ces deux commandes doivent être connectées.

38
00:03:51,647 --> 00:03:55,277
Une fois qu’elles sont connectées, l’alerte disparaît.

39
00:03:55,277 --> 00:03:59,113
Ensuite, définissons la coordonnée Z.

40
00:03:59,113 --> 00:04:06,578
Je vais utiliser la compensation
de la dérive en Z TruFocus™.

41
00:04:06,578 --> 00:04:10,208
Ici, je vais la régler sur « Continuous ZDC mode »,

42
00:04:10,208 --> 00:04:15,172
afin que la distance du fond de la plaque
au plan d’observation reste constante.

43
00:04:15,172 --> 00:04:21,010
Pour en savoir plus sur le mode ZDC,
reportez-vous à la deuxième vidéo de cette série.

44
00:04:21,010 --> 00:04:23,722
Cliquez sur « Live » pour commencer
le réglage de la mise au point,

45
00:04:23,722 --> 00:04:32,605
puis sur « Find offset » pour définir
la distance du décalage ZDC.

46
00:04:32,605 --> 00:04:41,740
Cliquez à nouveau sur « Live », puis connectez
la commande ZDC et la commande DAPI.

47
00:04:41,740 --> 00:04:45,743
Pour permettre la vérification de l’image d’acquisition
pendant l’expérience,

48
00:04:45,743 --> 00:04:59,007
cochez la case « Online Display » dans le gestionnaire
d’expériences pour chaque commande d’acquisition.

49
00:04:59,007 --> 00:05:04,053
Avant de commencer l’acquisition,
vérifions les paramètres d’acquisition enregistrés.

50
00:05:04,053 --> 00:05:09,892
Définissez les paramètres de dénomination des fichiers pour
que le nom du groupe s’enregistre dans le nom de chacun.

51
00:05:09,892 --> 00:05:13,563
Sous « Document Name », sélectionnez « All Options ».

52
00:05:13,563 --> 00:05:24,948
Ensuite, ajoutez « Position Group » au nom du fichier.

53
00:05:24,948 --> 00:05:39,713
Regardez l’aperçu pour vérifier l’ordre des propriétés.

54
00:05:39,713 --> 00:05:45,137
Ensuite, sous « Saving », vérifiez l’emplacement
de stockage des fichiers.

55
00:05:45,137 --> 00:05:50,767
Ici, je vais créer un sous-dossier
dans le répertoire « Pictures » nommé « Well B_Date, »

56
00:05:50,767 --> 00:06:05,198
qui générera automatiquement l’année,
le jour et le mois de l’acquisition.

57
00:06:05,198 --> 00:06:11,245
Cliquez sur « Start » pour lancer l’acquisition.

58
00:06:11,245 --> 00:06:14,707
Le mode ZDC TruFocus localise
la position de la mise au point,

59
00:06:14,707 --> 00:06:20,880
puis la platine se déplace vers le puits B4,
qui est le premier puits du groupe DAPI.

60
00:06:20,880 --> 00:06:25,010
Ensuite, le système acquiert une image DAPI.

61
00:06:25,010 --> 00:06:28,137
Une fois que l’acquisition d’image
du groupe DAPI est terminée,

62
00:06:28,137 --> 00:06:32,975
la platine passe au groupe RFP et poursuit l’acquisition.

63
00:06:32,975 --> 00:06:37,022
Toutes les acquisitions d’images sont terminées.

64
00:06:37,022 --> 00:06:42,610
Maintenant, vérifions les images.

65
00:06:42,610 --> 00:06:49,783
Voici le sous-dossier que j’ai créé
précédemment dans le répertoire « Pictures ».

66
00:06:49,783 --> 00:06:54,538
J’ai sauvegardé 9 positions dans 10 puits :
90 images sont donc disponibles.

67
00:06:54,538 --> 00:07:01,628
Chaque nom de fichier contient en outre
le nom de groupe « DAPI » ou « RFP ».

68
00:07:01,628 --> 00:07:20,190
Ici, ces images ont été correctement acquises
à l’aide de la méthode DAPI ou RFP, selon le nom du groupe.

69
00:07:20,190 --> 00:07:26,653
Pour en savoir plus sur le logiciel cellSens™,
visitez le site Web olympus-lifescience.com.