1
00:00:05,048 --> 00:00:11,178
Dies ist der dritte Teil unserer Videoserie zur Verwendung
des Well Navigator der cellSens Software.

2
00:00:11,178 --> 00:00:17,810
In diesem Video erkläre ich, wie Sie Wells gruppieren
und den Gruppen individuelle Beobachtungsbedingungen zuweisen.

3
00:00:17,810 --> 00:00:22,190
Der erste Teil dieser Videoserie behandelt
die erforderlichen Vorbereitungsschritte,

4
00:00:22,190 --> 00:00:26,945
das zweite Video das grundlegende Bildaufnahmeverfahren.

5
00:00:26,945 --> 00:00:30,448
Als Erstes zeige ich Ihnen, wie Sie Wells gruppieren und organisieren.

6
00:00:30,448 --> 00:00:33,660
Das sind die im zweiten Video gespeicherten Wells.

7
00:00:33,660 --> 00:00:36,913
Klicken Sie auf „Add a comment to the selected well“
(Kommentar zum ausgewählten Well hinzufügen).

8
00:00:36,913 --> 00:00:41,042
Nach einem Klick mit der linken Maustaste ziehen
Sie die Maus über die auszuwählenden Wells.

9
00:00:41,042 --> 00:00:45,713
Sie können einen Kommentar eingeben, beispielsweise
den Namen oder die Konzentration des Farbstoffs.

10
00:00:45,713 --> 00:00:49,633
Wählen Sie die gewünschte Markierungsfarbe und klicken Sie auf OK.

11
00:00:49,633 --> 00:01:04,190
Wiederholen Sie diese Schritte für die übrigen Wells.

12
00:01:04,190 --> 00:01:10,197
Es ist sinnvoll, die Wells nach
Farbstoff, Zelltyp oder Zellzustand zu gruppieren.

13
00:01:10,197 --> 00:01:14,242
Öffnen Sie den Bereich „Experiment Manager“ und klicken
Sie auf „New“ (Neu).

14
00:01:14,242 --> 00:01:17,870
Im Fenster „Experiment“ (Versuch) können Sie komplexe Versuche

15
00:01:17,870 --> 00:01:20,748
einfach durch Ziehen und Ablegen von Befehlen planen.

16
00:01:20,748 --> 00:01:24,710
Ich weise nun den Gruppen unterschiedliche Beobachtungsbedingungen zu.

17
00:01:24,710 --> 00:01:30,800
Wählen Sie ein Beobachtungsverfahren, zum Beispiel
DAPI, aus der Befehlsliste „Image Acquisition“ (Bilderfassung).

18
00:01:30,800 --> 00:01:34,053
Klicken Sie im Fenster „Experiment“ (Versuch) auf eine beliebige Stelle.

19
00:01:34,053 --> 00:01:37,640
Ziehen Sie eine Tisch-Schlaufe um den DAPI-Befehl.

20
00:01:37,640 --> 00:01:43,480
Ziehen Sie den Tisch zu beliebigen Wells in der DAPI-Gruppe
im Well Navigator.

21
00:01:43,480 --> 00:02:10,257
Klicken Sie auf den DAPI-Befehl und dann auf die Schaltfläche „Live“,
um Schärfe und Belichtungszeit einzustellen.

22
00:02:10,257 --> 00:02:14,885
Klicken Sie auf „Get Settings“ (Einstellungen laden), um
die Belichtungszeit im Experiment Manager zu speichern.

23
00:02:14,885 --> 00:02:18,723
Klicken Sie erneut auf „Live“, um ihn auszuschalten.

24
00:02:18,723 --> 00:02:24,062
Klicken Sie auf den Tisch-Schlaufen-Befehl und wählen Sie DAPI
aus der Liste „Position Group“ (Gruppe positionieren),

25
00:02:24,062 --> 00:02:30,150
damit nur die Wells der DAPI-Gruppe
mit den DAPI-Einstellungen aufgenommen werden.

26
00:02:30,150 --> 00:02:42,663
Wählen und kopieren Sie die Befehle und
fügen Sie sie im Fenster „Experiment“ (Versuch) ein.

27
00:02:42,663 --> 00:02:53,717
Klicken Sie auf den DAPI-Befehl
und ändern Sie die „Observation Method“ (Beobachtungsmethode) zu RFP.

28
00:02:53,717 --> 00:03:00,097
Klicken Sie auf „Apply Settings“ (Einstellungen übernehmen),
und dann auf „Live“.

29
00:03:00,097 --> 00:03:04,227
Verschieben Sie den Tisch zu beliebigen Wells der RFP-Gruppe.

30
00:03:04,227 --> 00:03:18,448
Stellen Sie die Belichtungszeit ein und klicken Sie auf
„Get Settings“ (Einstellungen laden), um sie zu speichern.

31
00:03:18,448 --> 00:03:21,035
Klicken Sie erneut auf „Live“.

32
00:03:21,035 --> 00:03:26,373
Klicken Sie auf den Tisch-Schlaufen-Befehl für RFP
und ändern Sie „Position Group“ (Gruppe positionieren) zu RFP,

33
00:03:26,373 --> 00:03:32,547
damit nur die Wells der RFP-Gruppe
mit den RFP-Einstellungen aufgenommen werden.

34
00:03:32,547 --> 00:03:39,470
Wir haben nun unterschiedlichen Well-Gruppen
unterschiedliche Beobachtungsbedingungen zugewiesen.

35
00:03:39,470 --> 00:03:43,015
Dieses gelbe Warnsymbol erscheint im Fenster „Experiment“ (Versuch),

36
00:03:43,015 --> 00:03:47,520
um auf einen Fehler in den Versuchseinstellungen hinzuweisen.

37
00:03:47,520 --> 00:03:51,648
Die Fehlermeldung besagt, dass diese beiden Befehle
verbunden werden müssen.

38
00:03:51,648 --> 00:03:55,278
Wenn das erledigt ist, verschwindet die Meldung.

39
00:03:55,278 --> 00:03:59,115
Als Nächstes definieren wir die Z-Koordinate.

40
00:03:59,115 --> 00:04:06,747
Hierfür verwende ich die TruFocus Z-Drift-Kompensation.

41
00:04:06,747 --> 00:04:10,208
In diesem Fall setze ich sie auf
„Continuous ZDC Mode“ (Kontinuierlicher ZDC-Modus),

42
00:04:10,208 --> 00:04:15,172
damit der Abstand zwischen Gefäßboden
und Beobachtungsebene konstant bleibt.

43
00:04:15,172 --> 00:04:21,012
Weitere Informationen über ZDC finden Sie im zweiten Video dieser Serie.

44
00:04:21,012 --> 00:04:23,890
Klicken Sie auf „Live“, um die Scharfeinstellung zu starten,

45
00:04:23,890 --> 00:04:32,607
und dann auf „Find Offset“ (Offset suchen),
um den ZDC-Offset-Wert einzustellen.

46
00:04:32,607 --> 00:04:41,907
Klicken Sie erneut auf „Live“ und verbinden Sie den ZDC-Befehl
und den DAPI-Befehl.

47
00:04:41,907 --> 00:04:45,745
Um die Verifizierung des aufgenommenen Bildes während
des Experiments zu aktivieren,

48
00:04:45,745 --> 00:04:59,008
markieren Sie das Kontrollkästchen „Online Display“
(Online-Anzeige) im Experiment Manager für alle Aufnahmebefehle.

49
00:04:59,008 --> 00:05:04,055
Vor Beginn der Aufnahme
prüfen wir die gespeicherten Aufnahmeeinstellungen.

50
00:05:04,055 --> 00:05:10,060
Die Dateibenennungsparameter können so eingestellt werden,
dass der Gruppenname im Bilddateinamen gespeichert wird.

51
00:05:10,060 --> 00:05:13,563
Wählen Sie unter „Document Name“ (Dokumentname)
„All Options“ (Alle Optionen).

52
00:05:13,563 --> 00:05:24,950
Fügen Sie „Position Group“ (Gruppe positionieren) zum Dateinamen hinzu.

53
00:05:24,950 --> 00:05:39,715
Prüfen Sie die Reihenfolge der Eigenschaften in der Vorschau.

54
00:05:39,715 --> 00:05:45,137
Prüfen Sie unter „Saving“ (Speichern) den Speicherort der Dateien.

55
00:05:45,137 --> 00:05:50,768
In diesem Fall erstelle ich einen Unterordner
„Well B_Date“ im Verzeichnis „Pictures“ (Bilder),

56
00:05:50,768 --> 00:06:05,198
so dass automatisch Jahr,
Tag und Monat der Aufnahme angegeben werden.

57
00:06:05,198 --> 00:06:11,247
Klicken Sie auf „Start“, um die Aufnahme zu beginnen.

58
00:06:11,247 --> 00:06:14,708
TruFocus ZDC lokalisiert die Fokusposition,

59
00:06:14,708 --> 00:06:20,882
und der Tisch verschiebt sich zu Well B4,
dem ersten Well der DAPI-Gruppe.

60
00:06:20,882 --> 00:06:25,010
Das System nimmt ein DAPI-Bild auf.

61
00:06:25,010 --> 00:06:28,138
Ist die Aufnahme von Bildern der DAPI-Gruppe beendet,

62
00:06:28,138 --> 00:06:32,977
verschiebt sich der Tisch zur RFP-Gruppe und die Aufnahme wird fortgesetzt.

63
00:06:32,977 --> 00:06:37,022
Alle Bildaufnahmen sind abgeschlossen.

64
00:06:37,022 --> 00:06:42,778
Nun prüfen wir die Bilder.

65
00:06:42,778 --> 00:06:49,785
Hier ist der Unterordner, den ich zuvor im
Verzeichnis „Pictures“ (Bilder) erstellt habe.

66
00:06:49,785 --> 00:06:54,540
Da ich 9 Positionen in 10 Wells gespeichert habe, sind 90 Bilder vorhanden.

67
00:06:54,540 --> 00:07:01,630
Jeder Dateiname enthält den Gruppennamen DAPI beziehungsweise RFP.

68
00:07:01,630 --> 00:07:20,190
In diesem Fall wurden die Bilder korrekt aufgenommen –
je nach Gruppenname mit der DAPI- oder RFP-Methode.

69
00:07:20,190 --> 00:07:26,653
Weitere Informationen über die cellSens Software
finden Sie auf Olympus-lifescience.com.