1
00:00:05,047 --> 00:00:11,177
Esta é a terceira parte da nossa série de vídeos sobre como
usar o Well Navigator no software cellSens.

2
00:00:11,177 --> 00:00:17,808
Neste vídeo, explicarei como agrupar poços e
atribuir condições de observação individuais a cada grupo.

3
00:00:17,808 --> 00:00:22,188
Consulte a primeira parte desta série de vídeo
para as etapas de preparação necessárias

4
00:00:22,188 --> 00:00:26,943
e a segunda para o procedimento básico de aquisição
de imagem de placa de poço.

5
00:00:26,943 --> 00:00:30,447
Primeiro, vou mostrar a você como
agrupar e organizar os poços.

6
00:00:30,447 --> 00:00:33,492
Estes são poços que foram salvos
no segundo vídeo.

7
00:00:33,492 --> 00:00:36,912
Clique em “Add a comment to
the selected well”.

8
00:00:36,912 --> 00:00:41,040
Clique com o botão esquerdo do mouse e
arraste-o pelos poços para selecioná-los.

9
00:00:41,040 --> 00:00:45,712
Você pode então inserir um comentário, como
o nome ou a concentração do corante.

10
00:00:45,712 --> 00:00:49,632
Selecione a cor de destaque
preferida e clique em “OK”.

11
00:00:49,632 --> 00:01:04,188
Repita os mesmos passos
para o resto dos poços.

12
00:01:04,188 --> 00:01:10,028
É útil agrupar os poços de acordo com
o corante, tipo de célula ou condição celular.

13
00:01:10,028 --> 00:01:14,240
Em seguida, abra o painel do Gerenciador
de experimentos e clique em “New”.

14
00:01:14,240 --> 00:01:17,868
Na janela Experiment, você pode planejar
experimentos complexos

15
00:01:17,868 --> 00:01:20,747
simplesmente arrastando
e soltando comandos.

16
00:01:20,747 --> 00:01:24,708
Atribuirei diferentes condições de
observação a cada grupo.

17
00:01:24,708 --> 00:01:30,798
Selecione um método de observação, por exemplo
“DAPI” da lista de comandos “Image Acquisition”.

18
00:01:30,798 --> 00:01:34,052
E então clique em qualquer lugar
na janela Experiment.

19
00:01:34,052 --> 00:01:37,638
Desenhe um ciclo na platina
em torno do comando DAPI.

20
00:01:37,638 --> 00:01:43,478
Em seguida, arraste a platina para qualquer
um dos poços no grupo DAPIno Well Navigator.

21
00:01:43,478 --> 00:02:10,088
Clique no comando DAPI e, em seguida, clique no botão
“Live” para ajustar o foco e o tempo de exposição.

22
00:02:10,088 --> 00:02:14,883
Clique em “Get Settings” para salvar o tempo
de exposição no Experiment Manager.

23
00:02:14,883 --> 00:02:18,722
Em seguida, clique em “Live”
novamente para desligá-lo.

24
00:02:18,722 --> 00:02:24,060
Clique no comando “stage loop” e, em seguida,
selecione DAPI da lista “Position group”

25
00:02:24,060 --> 00:02:30,150
para que apenas os poços pertencentes ao grupo DAPI
sejam adquiridos com as configurações de observação DAPI.

26
00:02:30,150 --> 00:02:42,662
Selecione, copie e cole os comandos
na janela Experiment.

27
00:02:42,662 --> 00:02:53,548
Clique no comando DAPI e, em seguida,
altere o “Observation Method” para “RFP”.

28
00:02:53,548 --> 00:03:00,097
Clique em “Apply Settings” e, depois,
clique em “Live”.

29
00:03:00,097 --> 00:03:04,058
Mova a platina para qualquer um
dos poços no grupo RFP.

30
00:03:04,058 --> 00:03:18,448
Ajuste o tempo de exposição e clique em
“Get settings” para salvá-lo.

31
00:03:18,448 --> 00:03:21,033
Em seguida, clique em “Live” novamente.

32
00:03:21,033 --> 00:03:26,372
Clique no comando “stage loop” para RFP
e, em seguida, altere o “Position Group” para RFP

33
00:03:26,372 --> 00:03:32,545
de forma que apenas os poços pertencentes ao grupo RFP
sejam adquiridos com as configurações de observação em RFP.

34
00:03:32,545 --> 00:03:39,468
Acabamos de atribuir diferentes condições de observação
a diferentes poços de acordo com seu grupo.

35
00:03:39,468 --> 00:03:43,013
Este símbolo de aviso amarelo aparece
na janela do experimento

36
00:03:43,013 --> 00:03:47,352
para alertá-lo quando há um erro nas
configurações do experimento.

37
00:03:47,352 --> 00:03:51,647
A mensagem de erro informa que esses
dois comandos precisam ser conectados.

38
00:03:51,647 --> 00:03:55,277
Quando isso for feito, o alerta desaparece.

39
00:03:55,277 --> 00:03:59,113
A seguir, vamos definir a coordenada Z.

40
00:03:59,113 --> 00:04:06,578
Vou usar a compensação desvio
de Z do TruFocus™.

41
00:04:06,578 --> 00:04:10,208
Neste caso, irei configurá-lo para
“Continuous ZDC mode”,

42
00:04:10,208 --> 00:04:15,172
o que garante que a distância do fundo do recipiente
em relação ao plano de observação permaneça constante.

43
00:04:15,172 --> 00:04:21,010
Para obter mais informações sobre o ZDC,
consulte o segundo vídeo desta série.

44
00:04:21,010 --> 00:04:23,722
Clique em “Live” para iniciar o ajuste do foco,

45
00:04:23,722 --> 00:04:32,605
e clique em “Find offset” para definir a
distância do deslocamento ZDC.

46
00:04:32,605 --> 00:04:41,740
Clique em “Live” novamente e conecte o comando
ZDC e o comando DAPI.

47
00:04:41,740 --> 00:04:45,743
Para habilitar a verificação da imagem de
aquisição durante o experimento,

48
00:04:45,743 --> 00:04:59,007
selecione a caixa de seleção “Online display” no
Experiment Manager para cada comando de aquisição.

49
00:04:59,007 --> 00:05:04,053
Antes de iniciar a aquisição,
vamos verificar as configurações de aquisição salvas.

50
00:05:04,053 --> 00:05:09,892
Pode-se definir os parâmetros de nome de arquivo para que
o nome do grupo seja salvo em cada arquivo de imagem.

51
00:05:09,892 --> 00:05:13,563
Em nome do documento, selecione “All Options”.

52
00:05:13,563 --> 00:05:24,948
Em seguida, adicione “Position Group”
ao nome do arquivo.

53
00:05:24,948 --> 00:05:39,713
Observe a visualização para verificar
a ordem das propriedades.

54
00:05:39,713 --> 00:05:45,137
Em seguida, em “Saving”, verifique o local onde
os arquivos estão armazenados.

55
00:05:45,137 --> 00:05:50,767
Neste caso, vou criar uma subpasta
no diretório “Pictures” chamada “Well B_Date”,

56
00:05:50,767 --> 00:06:05,198
que irá gerar automaticamente o ano,
o dia e o mês da aquisição.

57
00:06:05,198 --> 00:06:11,245
Clique em “Start” para iniciar a aquisição.

58
00:06:11,245 --> 00:06:14,707
O TruFocus ZDC localiza a posição do foco

59
00:06:14,707 --> 00:06:20,880
e, em seguida, a platina se move para o poço B4,
que é o primeiro poço no grupo DAPI.

60
00:06:20,880 --> 00:06:25,010
Em seguida, o sistema adquire uma imagem DAPI.

61
00:06:25,010 --> 00:06:28,137
Assim que a aquisição da imagem para o
grupo DAPI for concluída,

62
00:06:28,137 --> 00:06:32,975
a platina se move para o grupo RFP
e continua a aquisição.

63
00:06:32,975 --> 00:06:37,022
Todas as aquisições de imagens
foram concluídas.

64
00:06:37,022 --> 00:06:42,610
Agora, vamos verificar as imagens.

65
00:06:42,610 --> 00:06:49,783
Esta é a subpasta que criei anteriormente
no diretório “Pictures”.

66
00:06:49,783 --> 00:06:54,538
Existem 90 imagens disponíveis, pois
salvei 9 posições em 10 poços.

67
00:06:54,538 --> 00:07:01,628
E, cada nome de arquivo contém o
nome do grupo “DAPI” ou “RFP”.

68
00:07:01,628 --> 00:07:20,190
Nesse caso, essas imagens foram devidamente adquiridas
pelo método DAPI ou RFP, conforme o nome do grupo.

69
00:07:20,190 --> 00:07:26,653
Para obter mais informações sobre o software cellSens™,
visite o site www.olympus-lifescience.com