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Anwendungsbeispiele

Ansprechen von Mitochondrien in Krebs-Sphäroiden auf Arzneimittel


Die Wirkung eines Entkopplers auf Mitochondrien in Sphäroiden kann visualisiert werden.
Dies stellt eine vielversprechende Methode dar, die Toxizität für Mitochondrien zu untersuchen.

Ziele

Mitochondrien sind unverzichtbare Organellen, die die Zelle mit Energie versorgen. Eine mögliche toxische Wirkung auf die Mitochondrienfunktion ist ein wichtiger Faktor, der bei neuen Verbindungen getestet werden muss. In dieser Studie wurde das Ansprechen von Mitochondrien in 3D-Zellkulturen auf Arzneimittel untersucht.

Objectives

Vorbereitung der Proben

Eine Suspension aus HT-29-Zellen wurde in eine 96-Well-Platte mit U-Boden gegeben und 96 Stunden lang inkubiert, um 3D-Zellkulturen zu erhalten. Die Sphäroide wurden 45 Minuten lang mit MitoTracker Red CMXRos (ein vom Membranpotenzial abhängiger Farbstoff zum Anfärben von Mitochondrien) und FCCP (ein Entkoppler, 0–300 µM) inkubiert. Daran schloss sich eine Fixierung mit 4 % Formalin und eine Anfärbung der Zellkerne mit DAPI an.

Schlussfolgerung
Aufnahme und Analyse von Bildern

Es wurden konfokale Fluoreszenzbilder der oben beschriebenen Sphäroide aufgenommen. Die mittlere Lichtstärke der Zellkerne und Mitochondrien in den Zellen wurde durch die Überlagerung von Bildern geschätzt, die bei schrittweise um 5 µM erhöhter FCCP-Konzentration aufgenommen und anhand der mittleren Intensitätsprojektion ausgewertet wurden. Eine Wirkung von FCCP auf die Zellkerne wurde nicht beobachtet (Abbildung 1(a)), während die durchschnittliche Lichtstärke der Mitochondrien in einer Zelle mit ansteigender FCCP-Konzentration abnahm (Abbildungen 1(b) und 2).

Schlussfolgerung

MitoTracker ist ein eingetragenes Warenzeichen von Molecular Probes, Inc.
Olympus ist ein eingetragenes Warenzeichen. NoviSight und Insightful Analysis, Intelligent Answers sind Warenzeichen der Olympus Corporation.

Verwendete Produkte

3D-Zellanalyse-Software

NoviSight

Die 3D-Zellanalyse-Software NoviSight liefert statistische Daten für Sphäroide und 3D-Objekte in Mikrotiterplatten-Experimenten. Damit lassen sich die Zellaktivität in 3D quantifizieren und die Nachweisempfindlichkeit verbessern, seltene Zellereignisse können leichter erfasst und Zellzahlen genauer bestimmt werden. Die NoviSight Software ist für verschiedene Bildgebungsverfahren geeignet, d. h. von der konfokalen Point-Scan-Bildgebung, der Zwei-Photonen-Bildgebung und der konfokalen Spinning-Disk-Bildgebung bis hin zur hochauflösenden Lebendzell-Bildgebung.

  • Schnelle 3D-Bilderkennung von ganzen Strukturen bis hin zu subzellulären Merkmalen
  • Genaue statistische Analyse
  • Ausgestattet mit einer Vielzahl einsatzbereiter Standard-Assays oder einfache Erstellung eigener Assays

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