Ansprechen von Mitochondrien in Krebs-Sphäroiden auf Arzneimittel
Die Wirkung eines Entkopplers auf Mitochondrien in Sphäroiden kann visualisiert werden.
Dies stellt eine vielversprechende Methode dar, die Toxizität für Mitochondrien zu untersuchen.
Ziele
Mitochondrien sind unverzichtbare Organellen, die die Zelle mit Energie versorgen. Eine mögliche toxische Wirkung auf die Mitochondrienfunktion ist ein wichtiger Faktor, der bei neuen Verbindungen getestet werden muss. In dieser Studie wurde das Ansprechen von Mitochondrien in 3D-Zellkulturen auf Arzneimittel untersucht.
Vorbereitung der Proben
Eine Suspension aus HT-29-Zellen wurde in eine 96-Well-Platte mit U-Boden gegeben und 96 Stunden lang inkubiert, um 3D-Zellkulturen zu erhalten. Die Sphäroide wurden 45 Minuten lang mit MitoTracker Red CMXRos (ein vom Membranpotenzial abhängiger Farbstoff zum Anfärben von Mitochondrien) und FCCP (ein Entkoppler, 0–300 µM) inkubiert. Daran schloss sich eine Fixierung mit 4 % Formalin und eine Anfärbung der Zellkerne mit DAPI an.
Schlussfolgerung
Aufnahme und Analyse von Bildern
Es wurden konfokale Fluoreszenzbilder der oben beschriebenen Sphäroide aufgenommen. Die mittlere Lichtstärke der Zellkerne und Mitochondrien in den Zellen wurde durch die Überlagerung von Bildern geschätzt, die bei schrittweise um 5 µM erhöhter FCCP-Konzentration aufgenommen und anhand der mittleren Intensitätsprojektion ausgewertet wurden. Eine Wirkung von FCCP auf die Zellkerne wurde nicht beobachtet (Abbildung 1(a)), während die durchschnittliche
Lichtstärke der Mitochondrien in einer Zelle mit ansteigender FCCP-Konzentration abnahm (Abbildungen 1(b) und 2).
MitoTracker ist ein eingetragenes Warenzeichen von Molecular Probes, Inc.
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