Identificar la cirrosis en el tejido hepático con un escáner de portaobjetos dedicado a la investigación

Introducción

La cirrosis, también conocida como cirrosis hepática, es una enfermedad provocada por la disfunción del hígado debido a lesiones crónicas. Estas lesiones se caracterizan por la presencia de tejido cicatricial que reemplaza el tejido hepático normal. Por lo general, la enfermedad evoluciona lentamente a lo largo de meses o años. A menudo, en la fase temprana no se producen síntomas.

Entre las causas que provocan la cirrosis, suelen destacar: el consumo de alcohol, la hepatitis B, la hepatitis C y la esteatohepatitis no alcohólica (hígado graso no alcohólico).

Un factor que ayuda a su diagnóstico es la cantidad de fibras de colágeno que contiene el tejido hepático. Es posible usar métodos especiales de tinción a fin de poner en evidencia estas fibras de cara al análisis de imágenes.

Experimento

Se tomaron biopsias de hígado de ratón y se inmovilizaron en un portaobjetos de vidrio. A continuación, se aplicó al tejido una tinción compuesta de rojo sirio con ácido pícrico (rojo picrosirio) y verde rápido para poner en evidencia el tejido fibroso.

La tinción compuesta de rojo picrosirio y verde rápido es una variante de la tinción rojo picrosirio, en la que se lleva a cabo una contratinción del tejido circundante con verde rápido para poner más en evidencia las fibras de colágeno teñidas de rojo.

En histología, la tinción de rojo sirio se usa en diversos ámbitos de diagnóstico con el fin de observar los niveles de fibrosis en muchos casos de inflamación inducida por cáncer o por patologías vasculares o metabólicas.

Si se usa la microscopía de campo claro, puede observarse lo siguiente:

Se llevó a cabo el procesamiento de imágenes de los portaobjetos teñidos con un escáner de portaobjetos dedicado a la investigación SLIDEVIEW™ VS200, bajo una magnificación de 40x y con una lente de objetivo UPlanXApo de 40x, dotada de una apertura numérica (A. N.) de 0,95, para obtener la mejor resolución posible (0,17 μm/píxel).

_{Tejido hepático de ratón. Grosor: 4 μm. Tinción: rojo picrosirio y verde rápido [laboratorio: Universidad de Medicina de Viena, Departamento de Medicina III, Laboratorio HEPEX para la Hipertensión Portal y la Fibrosis en las Enfermedades Hepáticas, (Austria)].}
 

Sin embargo, como la lente de objetivo UPlanXApo de 40x tiene una profundidad de enfoque de solo 0,82 μm, y los cortes de tejido hepático son finos (alrededor de 4 μm), al aplicar el algoritmo de imagen focal extendida (EFI) también se mejora la calidad de la imagen en términos de enfoque.

La EFI permite adquirir imágenes con una profundidad de enfoque prácticamente ilimitada.
Para ello, a partir de muchas imágenes enfocadas de forma diferente, el software brinda una imagen compuesta dotada de nitidez en todas las áreas.

En primer lugar, el proceso de adquisición de imágenes ejecuta un apilamiento en Z y, a continuación, procede con la EFI a partir del apilamiento en Z.

La ilustración que aparece a continuación muestra varios cuadros adquiridos en distintas posiciones Z. En cada uno de estos cuadros, solo hay unos pocos segmentos de imagen que están nítidamente enfocados. Estos segmentos aparecen en color, y los segmentos de imagen nítidamente enfocados se ensamblarán en la EFI.

_{Tejido hepático de ratón: (a) imagen de origen; (b) ajuste de umbral manual (azul) para el tejido teñido de verde; (c) ajuste de umbral manual (amarillo) para las fibras teñidas de rojo, y (d) umbral combinado de las dos fases.}

 

_{El análisis puede realizarse en el corte completo del hígado de ratón.}