Análisis de fármacos anticancerígenos: Tratamiento específico en el interior de los esferoides

El análisis de imágenes fluorescentes combinado con la utilización del sistema de análisis de procesamiento de imágenes celulares permite caracterizar los compuestos centrados en una zona hipóxica dentro de los esferoides.

Objetivos

La heterogeneidad celular en el tejido tumoral está relacionada estrechamente con la progresión del cáncer, la angiogénesis, la resistencia del fármaco y otros aspectos. Por lo tanto, la heterogeneidad celular se está convirtiendo en un factor importante para la estrategia del desarrollo de fármacos. Se prevé que sea una herramienta muy útil en el análisis de la heterogeneidad de las células cancerígenas, ya que el modelo de esferoide del cáncer in vitro puede recapitular un microentorno de tumores sólidos en el tejido vivo. El sistema de análisis de imágenes analiza de forma cuantitativa los datos de imágenes obtenidos de las observaciones fluorescentes confocales. En este estudio, se evaluó cuantitativamente la citotoxicidad de un fármaco a través de la visualización del tamaño del esferoide y el microentorno dentro de los esferoides.

Preparación de muestras

Los esferoides cancerígenos (TH-29) se prepararon usando una placa PrimeSurface® 96U  (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD). Se añadieron Hoechst 33342 y MAR probe (GORYO Chemical) a los esferoides un día antes de la medición llevada a cabo por el sistema A continuación, se visualizó el tamaño y la zona hipóxica de los esferoides.

Conclusión

Según las imágenes de proyección de intensidad máxima de los esferoides compuestos por distintos números de células HT-29, la zona hipóxica aumentó con un crecimiento en el tamaño del esferoide (Figura 1). El tratamiento de los esferoides que tenían una gran zona hipóxica con irinotecán (inhibidor de la topoisomerasa) consiguió una reducción simultánea del tamaño del esferoide y de la zona hipóxica [Figuras 2(a) y (b)]. Sin embargo, el tratamiento con rotenona (un inhibidor de la cadena de transferencia de electrones en el mitocondrias) solo permitió reducir la zona hipóxica sin reducir el tamaño del esferoide [Figuras 2(c) y (d)]. Estos resultados indican que el sistema permite la evaluación cuantitativa de los diversos efectos de los fármacos en la heterogeneidad de las células cancerígenas.

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