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Nota de aplicación

Respuesta a los fármacos: Interior y exterior de los cultivos celulares 3D


El efecto de los fármacos en los cultivos celulares 3D se evaluó a través del procesamiento de imágenes celulares.
Se investigaron las diferencias en el efecto de los fármacos tanto en el exterior como en el interior de los cultivos celulares 3D, por ejemplo en los esferoides.

Objetivos

Hace poco, se han comenzado a usar cultivos celulares 3D, como los esferoides, para estudiar la respuesta de las células a los fármacos. Sin embargo, la diferencia de la respuesta desde el interior y el exterior de los cultivos celulares en 3D nunca antes había sido considerada. En este estudio, se ha investigado esta diferencia a través de la observación de la profundidad de los esferoides con un microscopio confocal.

Objectives

Preparación de las muestras

Fucci es un indicador del ciclo celular que utiliza un esquema de dos colores. Los esferoides compuestos por células HT-29 transgénicas, expresadas en Fucci, fueron expuestas a 10 nM de cisplatino. Después de un periodo de incubación de 96 horas, el medio que contenía cisplatino se retiró de los cultivos celulares y estos últimos se fijaron con formalina al 4 % tras el tratamiento con un reactivo de transparencia.

Conclusión
Adquisición y análisis de imágenes fluorescentes

Las imágenes fluorescentes confocales de los esferoides mencionados anteriormente se obtuvieron en cada incremento de espesor de 5 μm, desde la superficie a 150 μm de profundidad. El índice de luminosidad del rojo (fases G0 y G1) a verde (fases S, G2 y M) en cada capa se analizó con el software de análisis. En ausencia de cisplatino, no se observó una diferencia significativa en la proporción rojo/verde entre el exterior y el interior (Figura 1). En presencia de 10 nM de cisplatino, la proporción rojo/verde aumentó con un incremento en la distancia frente al valor de la superficie (Figuras 2 y 3).

Conclusion

Olympus es una marca registrada, y NoviSight and Insightful Analysis, Intelligent Answers son marcas comerciales de Olympus Corporation.

Productos usados para esta aplicación

Software de análisis celular 3D

NoviSight

  • Reconocimiento de imagen 3D de la estructura global al nivel subcelular
  • Análisis estadístico
  • Diversos ensayos predeterminados

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