Evaluación de la eficacia de fármacos: Respuesta de los esferoides a un fármaco

La observación confocal combinada con la utilización del sistema permite evaluar la eficacia de fármacos en esferoides teñidos con un colorante fluorescente apropiado.

Objetivos

La mayoría de ensayos de eficacia para fármacos anticancerígenos se han basado en la utilización de células inmovilizadas, cultivadas como monocapas 2D. Sin embargo, estas monocapas 2D no pueden recapitular el entorno nativo complejo de las células cancerígenas, como la estructura 3D. Por ello, los cultivos celulares 3D como los esferoides están captando la atención como modelos dotados de potencial para maximizar la relevancia fisiológica de los estudios basados en células. En este estudio, se evaluó la eficacia de la estaurosporina (STS) en los esferoides a través de la observación confocal combinada con la utilización del sistema de análisis de imágenes celulares.

Preparación de muestras

Se cultivó una suspensión celular de HeLa en una placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) con una proporción de 500 células/pocillo. Se añadió STS diluido en serie a cada pocillo 48 horas después del inicio del cultivo celular. Se añadió Hoechst 33342 (colorante nuclear) y yoduro de propidio (PI: colorante para células muertas) en cada pocillo 24 horas después de la incorporación del STS.

Conclusión
Adquisición y análisis de imágenes fluorescentes

Las imágenes fluorescentes de los esferoides mencionados anteriormente, teñidos con Hoechst 33342 y PI, se obtuvieron con el sistema. Como puede verse en la Figura 1^*, la proporción de células muertas (pseudorojas) con respecto a todas las células (pseudoazules) en cada pocillo aumentó con el aumento de la concentración de STS. Las proporciones pueden mostrarse gráficamente en función de la concentración de STS (Figura 2, barras: SD, n=8) usando la identificación de núcleos y contando los resultados generados por el software de análisis. Estos resultados indicaron que el sistema permite realizar una evaluación sencilla de la eficacia del fármaco en una microplaca.

PrimeSurface es una marca comercial registrada de Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus es una marca registrada, y NoviSight and Insightful Analysis, Intelligent Answers son marcas comerciales de Olympus Corporation.

* Si bien estas líneas celulares forman parte de las más importantes para la investigación médica, es imperativo reconocer la contribución de Henrietta Lacks a la ciencia que se produjo sin su consentimiento. Esta injusticia, a pesar de haber dado lugar a descubrimientos clave en inmunología, enfermedades infecciosas y cáncer, también ha generado importantes debates sobre la privacidad, la ética y el consentimiento en la medicina.
Para obtener más información sobre la vida de Henrietta Lacks y su contribución a la medicina moderna, haga clic aquí.
http://henriettalacksfoundation.org/