Monitorización de la formación de esferoides depositados en placas multipocillo con fondo en U por medio del sistema de monitorización de incubación

Esquema experimental

Los esferoides son estructuras celulares 3D diseñadas para simular las características del tejido in vivo; por tanto, son de gran importancia en una amplia variedad de análisis, como al probar el potencial de diferenciación de las células madre o la eficiencia de medicamentos. Para la formación de esferoides, se usan frecuentemente las placas de fondo en U. El siguiente experimento fue llevado a cabo para evaluar los beneficios del Sistema de monitorización de incubación CM20 Provi™ a fin de monitorizar la formación de esferoides en las placas de fondo en U.

Procedimiento experimental

Se cultivaron células madre neuronales de ratón en una placa de 96 pocillos dotados de un fondo en U (Sumitomo Bakelite, Cat. N.º MS-9096U) bajo una densidad de 2,500 células/0,1 mL/pocillo con el suero Knock Out DMEM/F-12 y suplidos de B27 (ud.), GlutaMax (ud.), bFGF (20 ng/mL), EGF (10 ng/mL), Heparina (0,0002 %) y penicilina estreptomicina (1%).

La placa preparada de 96 pocillos fue ubicada en el sistema de monitorización de incubación Provi CM20. La posición de enfoque fue determinada de forma manual y las células fueron procesadas en imágenes de forma automática mediante el sistema CM20 a cada hora por un período de 60 horas a fin de monitorizar la formación de los esferoides.

Resultados

Figura 1. Formación de esferoides a partir de las células madre neuronales de ratón

Mediante el análisis de las imágenes adquiridas, fue posible concluir que después del cultivo, las células se adhieren con rapidez, devienen esferoides en aproximadamente 10 horas, e incrementan su tamaño de forma gradual.

Beneficios del análisis de cultivos celulares con el sistema CM20

El procesamiento de imágenes con el sistema Provi CM20 se ejecutó con éxito usando las placas de fondo en U. El mayor beneficio de este método es que las células pueden permanecer sin cambios en la incubadora, lo que mitiga efectos contraproducentes en la formación de esferoides a partir del procesamiento de imágenes. Este experimento también demuestra que con el CM20, la posición de enfoque sólo necesita determinarse una sola vez y puede ser mantenida posteriormente por muchos días, incluso en el caso de objetos en suspensión. En función de los resultados, se pudo concluir que el sistema Provi CM20 puede ser usado para ejecutar masivos análisis en intervalos de tiempo usando placas de 96 pocillos con fondo en U. Esto es útil en especial para la monitorización de medicamentos en modelos de esferoides tumorales. Se prevé también que el sistema CM20 puede ser usado para monitorizar la diferenciación de las células madre (por ejemplo, células madre neuronal) o los cuerpos embrionarios (EB); por tanto, se ejecutaran ensayos con este método para dichas aplicaciones en experimentos venideros.

Reconocimientos

Esta nota de aplicación se ha elaborado con la ayuda del siguiente investigador:
Dr. Takahiro Yamaguchi, Investigador Principal, ACEL, Inc.

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