Avantages de l’utilisation du condenseur motorisé du scanner de lames SLIDEVIEW™ VS200 pour ajuster le contraste des images des échantillons biologiques

Ajustement du contraste des images des échantillons biologiques

En microscopie optique, le diaphragme d’ouverture peut être utilisé pour ajuster la résolution et le contraste étant donné que la variation du diamètre d’ouverture du diaphragme modifie le cône de lumière projeté dans l’objectif. Ajuster correctement le diaphragme d’ouverture du condenseur est essentiel pour obtenir des images de haute qualité, car cela permet d’ajuster l’ouverture numérique, la pouvoir de résolution, la profondeur de champ et les caractéristiques générales de l’image.

Il existe deux moyens d’ajuster la quantité de lumière atteignant un échantillon : par l’ajustement de l’ouverture du diaphragme du condenseur ou par la modification de la puissance de la source de lumière.

Les images ci-dessous d’un échantillon de foie de souris coloré à l’hématoxyline et à l’éosine ont été prises avec un objectif 40x UPlanXAPO (ON de 0,95) monté sur un scanner de lames VS200 avec différentes ouvertures du diaphragme du condenseur.

Ces images (de gauche à droite) illustrent comment l’ouverture du diaphragme du condenseur entraîne une perte de contraste mais permet de gagner en résolution.*

Le système VS200 est doté d’un condenseur universel motorisé Olympus BX3-UCD8A (ON de 0,9) dont l’ouverture peut être facilement ajustée. L’ouverture peut être ajustée au moyen du logiciel du système de la fermeture à l’ouverture totale par incrément de 1 %. Le système exécute de manière automatique ces ajustements en fonction du grossissement et de l’ouverture numérique (ON) de l’objectif.

L’ouverture du diaphragme d’ouverture par défaut du système VS200 correspond à 75 % de l’ON de l’objectif. Plus l’ON de l’objectif est grande, plus l’ouverture du diaphragme l’est aussi. Il est possible de créer une nouvelle méthode d’observation dans laquelle le diaphragme d’ouverture correspond, par exemple, à 50 % de l’ON de l’objectif.

Pour ce faire, lancez le logiciel VS200-ASW et cliquez sur « Device Customization » (Personnalisation de l’appareil). Faites une copie de la méthode d’observation BF et nommez-la.

Enfin, définissez la valeur du diaphragme d’ouverture (diaphragme d’ouverture BX3) et enregistrez la méthode d’observation.

_{Remarque : la modification du diaphragme d’ouverture peut avoir un impact sur la correction de teinte de la nouvelle méthode d’observation en fond clair.
Étalonner la correction de la teinte séparément pour la nouvelle méthode d’observation.}

Exemple d’application :

Le frottis cervicovaginal est une méthode de dépistage utilisée pour détecter des cellules précancéreuses et cancéreuses au niveau du col de l’utérus.

Dans l’exemple suivant, le frottis a été coloré à l’hématoxyline, à l’Orange G6 et à l’éosine. Les images de gauche ont été prises avec une ouverture de diaphragme de 75 % et celles de gauche avec une ouverture de 50 %. Les images montrent que la plus petite ouverture du diaphragme permet d’accentuer le contraste en réduisant légèrement la résolution.

_{Images acquises avec un objectif UPlanXAPO 20x à ON de 0,8 et l’ouverture du diaphragme d’ouverture par défaut (75 %) ou une ouverture de 50 % qui améliore le contraste tout en minimisant la perte de résolution.}

Conclusion :

Le diaphragme à ouverture ajustable et motorisée du système VS200 permet aux utilisateurs de tirer le maximum de leurs échantillons, notamment s’ils sont très pâles ou peu contrastés. Cette technique peut être utilisée sur les échantillons hématologiques ainsi que les lames d’immunohistochimie (IHC) avec faible contre-coloration.

_{* Pour de plus amples renseignements sur le diaphragme d’ouverture et son utilisation, consultez la page Internet suivante :
www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/java/kohler/contrast}