Vous ne savez pas si votre microscope inversé daté fait le poids face aux nouvelles applications de recherche à long terme sur les cellules vivantes ou les organismes modèles ? Votre budget ne vous permet pas d’acquérir un nouveau microscope inversé ? Vous serez sans doute surpris d’apprendre que quelques modifications clés suffisent pour que votre microscope actuel puisse encore vous permettre d’atteindre vos objectifs de recherche.
Outre les mises à niveau évoquées dans la partie 1 et la partie 2 de notre série sur l’amélioration des microscopes, l’ajout d’une chambre ou d’un boîtier de contrôle de l’environnement peut vous aider à atteindre vos objectifs de recherche en vous permettant de réaliser des expériences d’imagerie en temps réel que vous n’auriez jamais envisagées.
Importance du contrôle de l’environnement pour une imagerie stable des cellules vivantes
Le processus d’imagerie de cellules vivantes peut prendre 20 minutes, quelques heures, voire même plus de temps. Outre la dérive de la mise au point associée aux variations de la température ambiante inhérentes aux expériences de longue durée, vous devez pouvoir contrôler les facteurs suivants :
- La température (jusqu’à 37 °C [99 °F] au maximum ou 22 °C [72 °F] au minimum)
- L’humidité
- Le taux de CO2 (et d’O2 si les conditions hypoxiques le justifient)
Il existe des moyens très simples d’adapter les microscopes pour contrôler l’ensemble ou l’un de ces facteurs environnementaux et de mettre en œuvre diverses applications d’imagerie de cellules vivantes et d’organismes modèles.
Les avantages des unités sur platine
Pratiques, les systèmes sur platine tels que ceux de Tokai Hit ou d’Okolab sont dotés de chambres amovibles. Ils permettent ainsi d’ajouter des dispositifs de contrôle de l’environnement ou de les retirer, en fonction des besoins. Ce mode de fonctionnement s’avère notamment utile lorsque l’instrument est également utilisé pour des applications qui ne nécessitent pas d’imagerie de cellules vivantes.
De plus, ces systèmes sont particulièrement efficaces pour préserver la viabilité des cellules pendant des heures, voire des jours. Les orifices de perfusion permettent le réapprovisionnement en eau et en milieux nécessaires au maintien du taux d’humidité et à l’apport en nutriments et en agonistes, et les éléments chauffants de solution intégrés minimisent les chocs thermiques.
Notez également que les objectifs à immersion font office de dissipateurs thermiques lorsqu’ils se retrouvent en contact avec votre échantillon. Envisagez d’utiliser un élément chauffant d’objectif si vous utilisez ces composants optiques.
Boîtiers de microscope pour l’imagerie de cellules vivantes
Un boîtier complet d’incubation pour microscope constitue une autre option. Si les boîtiers sont difficiles à retirer du microscope, ils permettent de maintenir le contrôle de l’environnement dans un volume plus important qu’une chambre sur platine.
Ces boîtiers sont suffisamment spacieux pour accueillir des plates-formes de distribution de solution et offrir des environnements à température stable. Ce système profite aussi bien à l’échantillon qu’au microscope, dans la mesure où des cycles chaud/froid fréquents peuvent accroître l’usure des composants du microscope. De nombreux fabricants proposent un modèle équipé d’un dispositif occultant permettant de maintenir un environnement sombre au sein du boîtier et évitant d’avoir à disposer d’une salle de microscopie séparée.
Impact des variations de l’environnement d’une pièce sur l’imagerie à intervalles
Il est important de noter que la plupart des systèmes d’incubation pour microscope sont étalonnés pour une température moyenne de 25 °C (77 °F). Certains systèmes surveillent la température avec précision et la corrigent rapidement. Il est cependant préférable d’éviter de placer votre instrument dans des zones sujettes à des variations thermiques. Évitez également de placer l’instrument sous des bouches d’aération. Si cette configuration est inévitable, utilisez des déflecteurs pour écarter le flux d’air du microscope.
Enfin, assurez-vous que le microscope se trouve à l’écart d’instruments volumineux tels que des centrifugeuses, des réfrigérateurs, des congélateurs et des portes fréquemment empruntées. Ces éléments peuvent introduire des artefacts de vibration dans votre expérience d’imagerie au cours du temps. Une table antivibrations pneumatique peut contribuer à isoler votre instrument. Il est cependant préférable de préserver votre expérience d’imagerie de toute perturbation vibratoire.
Tirez le meilleur parti de votre microscope
Vous souhaitez obtenir d’autres conseils pour améliorer votre microscope ? N’oubliez pas de consulter la partie 1 et la partie 2 de cette série pour découvrir d’autres améliorations à apporter à votre système pour optimiser l’efficacité de votre imagerie de cellules vivantes. Cliquez sur les liens ci-dessous pour y accéder :
- 5 Ways to Extend the Life (and Performance) of Your Microscope
- How to Make Your Microscope Light Source Last Longer and Perform Better
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