Life Science Solutions
アプリケーション

フィーダーフリーiPS細胞を短時間で正確にカウント


背景 -iPS細胞の継代培養-

近年、“再生医療“が注目されています。この再生医療研究にブレイクスルーをもたらしたiPS細胞(人工多能性幹細胞=induced pluripotentstem cell)は今後再生医療だけではなく創薬・疾患研究においても重要になってきます。それら研究を進めるためには多くのiPS細胞が必要となりますが、iPS細胞を効率良く継代培養して増やすには常に同じ条件でiPS細胞を培養しつづけなければなりません。
特に、iPS細胞の樹立時や心筋細胞や神経細胞等への分化誘導時には各プロトコールに沿って播種する生細胞濃度をコントロールする必要があります。そのためiPS細胞の培養には”細胞カウント”が必要不可欠な作業として日々行われています。iPS細胞をカウントする際、最も難しいのはiPSコロニーが残存することで細胞数を正確にカウントできないことにありました。このコロニー全てをひとつひとつの細胞に”ばらす”作業は物理的に細胞へダメージを与えてしまいます。そのため、このばらす作業は研究者の経験則になっており、結果的に、作業者によってカウント結果に違いが生じることもありました。

iPSコロニー
Figure 1. iPSコロニー

自動セルカウンター Cell Counter model R1を用いたフィーダーフリーiPS細胞の正確なセルカウント

オリンパスの自動セルカウンターCell Counter model R1は目と同じように細胞を認識する独自のソフトウェアアルゴリズムや液体レンズのスピーディーで正確なオートフォーカス機能により重なり合った複数の細胞を個々の細胞として認識し正確にカウントすることが可能です。Cell Counter model R1を用いてフィーダーフリーiPS細胞のカウントを行ったところ、iPSコロニーもひとつひとつの細胞として正確にカウントすることができました。また、血球計算盤による目視観察と比較してもほぼ同程度の結果を出力することができました。

液体レンズによるフォーカスあわせイメージ
Figure 2. 液体レンズによるフォーカスあわせイメージ (courtesy iPS PORTAL Inc.)
高速にフォーカシングし、カウント開始から約15秒*で結果を出力します。 * 1x106 cells/mL濃度未満のHeLa細胞/HL60細胞 使用時
 

Cell Counter model R1によるフィーダーフリーiPS細胞の正確なセルカウントiPS コロニーの細胞認識結果
Figure 3. Cell Counter model R1によるフィーダーフリーiPS細胞の正確なセルカウント

血球計算盤1マスの約5倍の視野をセルカウント

Figure 4. iPS コロニーの細胞認識結果


下記Figure5からもCell Counter model R1 のiPS細胞カウント結果の平均値は目視観察(血球計算盤)とほぼ同じ値であり、装置間のバラツキもありませんでした。標準偏差も目視観察とほぼ同等の結果が得られました。
Cell Counter model R1はiPSコロニーも正確にカウントし作業者によらず常に信頼性の高い細胞カウントを実現し効率良く質の高い細胞培養をサポートします。

目視観察(血球計算盤)とのカウント結果比較
Figure 5.  目視観察(血球計算盤)とのカウント結果比較
血球計算盤測定は4箇所測った平均値をn=1として、n=4のデータを取得。Cell Counter model R1を2台使用しそれぞれn=4でデータを取得。これを1セットとし3回実施。グラフはその計3回をまとめたデータである。

サンプル作製、画像の取得およびデータ提供にご協力いただいた企業: 株式会社iPSポータル
 

正確で信頼性の高い細胞カウントを実現する自動セルカウンター Cell Counter model R1

Cell Counter model R1は独自のソフトウェアアルゴリズムにより、さまざまな細胞のカウントを正確に行えます。凝集した細胞を個々の細胞として自動的に認識・計測し、サイズや形状、生細胞・死細胞の分類も可能です。
また、結果を細胞画像とともにレポートとして保存でき、計測から記録まで細胞カウント作業の負担を軽減します。

このアプリケーションノートに関連する製品

自動セルカウンター

Cell Counter model R1

  • 細胞を認識する独自のアルゴリズムを搭載
  • 革新的な液体レンズによるオートフォーカス
  • 使いやすさを追求したデザイン

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