新しい生細胞またはモデル微生物の長期研究用の新しいアプリケーションを持ちながら、旧式の倒立型研究用顕微鏡で扱うことが可能かどうかわからないということはありませんか？新しい倒立顕微鏡にかかるコストは、あなたの予算を超えていますか？お手元の顕微鏡に変更をいくつか加えることで研究目的を達成する手段がまだあることを知ったら、あなたは驚くかもしれません。
顕微鏡の性能向上シリーズの第1部と第2部で検討したアップグレードに環境制御チャンバーまたはエンクロージャーを追加することで、あなたが実現できると思わなかったライブイメージング研究目標の達成を補助できます。
安定したライブセルイメージングのための環境制御の重要性
ライブセルイメージングに要する時間は、20分、数時間、あるいはそれ以上の場合もあります。長時間の実験では、室温変化に伴うZフォーカスドリフトに加えて、次の要素を制御する必要があるかもしれません。
- 温度（最高 37°C [99°F]または最低22°C [72°F]）
- 湿度
- CO2（および低酸素状態が関係する場合はO2）
顕微鏡環境の制御は、これらの能力のいずれかまたはすべてを含んで構成することが可能で、様々な生細胞やモデル微生物のイメージングアプリケーションのアップグレードを容易にします。
ステージトップ装置の利点
東海ヒット社製やOkolab社製のステージトップシステムは、簡単に取り外し可能なチャンバー装置です。この装置は、必要に応じて環境制御を追加したり取り外したりすることが可能です。この機能は、ライブセルイメージングを必要としないアプリケーションにも機器を使用する場合に特に便利です。
さらに、数時間から数日間可視化を持続する場合には、これらのシステムは非常に効果的です。灌流ポートにより、湿度や栄養／アゴニストのための水および培地の補充が可能となり、市販のインライン溶液ヒーターによって熱衝撃を最小限に抑えることができます。
液浸対物レンズは標本に接触するとヒートシンクとして機能するため、これらの光学系を使用する場合に対物レンズヒーターを追加したいと思われるかもしれません。
ライブセルイメージングのための顕微鏡エンクロージャー
もう一つのオプションは、フルサイズの顕微鏡インキュベーションエンクロージャーです。エンクロージャーは顕微鏡から簡単に取り外せないものですが、その反面、ステージトップチャンバーよりも大きな容積の中で環境制御を維持することができます。
これらのエンクロージャーは、液体分配リグを収容するための十分な容積を持ち、安定した温度環境を提供します。頻繁に高温／低温の周期を繰り返すと顕微鏡付属部品の摩耗や亀裂を増大させる可能性があるため、この特徴は標本と顕微鏡の両方にメリットがあります。製造業者の多くは、エンクロージャー内の暗環境を維持し、別個の顕微鏡室の必要性をなくすため、遮光モデルを提供しています。
タイムラプスイメージングに対して室内環境の変化が及ぼす影響
顕微鏡培養システムは平均温度25°C （77°F）に校正されていることに留意することが重要です。温度を精密にモニターし、迅速な温度調節を行うシステムもあります。そのようなシステムであっても、装置を温度変化の影響を受ける区域に置くことは避けるのが最も良い方法です。装置を通気口の下に置くことは避けるべきですが、避けられない場合は、バッフルを使用して気流の向きを顕微鏡から遠ざけるようにしてください。
最後に、顕微鏡が、遠心分離機、冷蔵庫、冷凍庫、頻繁に開け閉めするドアなどの大きな装置から離れた場所にあることを確認します。これらの大型装置は、時系列イメージング実験に振動アーチファクトを与えるおそれがあります。空気圧防振テーブルは機器を隔離するために役立ちますが、イメージング実験では振動による妨害を避けることが最も良い方法です。
お手元の顕微鏡をより有効に活用しましょう
顕微鏡の性能向上について専門家のヒントがもっと必要ですか？このシリーズの第1部と第2部をレビューして、効果的なライブセルイメージングを検討するための他のシステムアップデートを見つけてください。実際に見てみましょう。
