SLIDEVIEW™ VS200 슬라이드 스캐너의 전동 콘덴서로 표본의 대비를 조정할 때의 장점

샘플 대비 조절

광학 현미경으로는 조리개로 해상도와 대비를 조절할 수 있는데, 조리개의 구멍 크기에 따라 대물렌즈에 투영되는 광원뿔이 변하기 때문입니다. 콘덴서 조리개는 개구수, 분해능, 피사계 심도, 전체적인 이미지 성질을 관장하므로 고품질 이미지를 얻으려면 이를 올바르게 조정해야 합니다.

샘플에 닿는 빛의 양을 조절하는 방법으로는 두 가지가 있는데, 콘덴서 조리개를 조정하거나 광원의 전력량을 바꾸는 것입니다.

다음은 H&E 염색을 한 쥐의 간 표본을 콘덴서 조리개를 다양하게 설정한 VS200 슬라이드 스캐닝 시스템의 40x UPlanXAPO (NA 0.95) 대물렌즈에서 획득한 예시입니다.

왼쪽 이미지에서 오른쪽으로 갈수록 콘덴서 조리개를 열면 이미지가 대비를 상실하지만 해상도가 증가한다는 것이 나타납니다.*

VS200 시스템에는 Olympus BX3-UCD8A (NA 0.9) 전동식 범용 콘덴서가 있어 조리개의 조절이 쉽습니다. 시스템 소프트웨어를 사용하면 닫힌 조리개를 1%씩 열어 완전히 개방할 수 있습니다. 이는 대물렌즈의 배율과 개구수(NA)에 따라 시스템에서 자동으로 조정됩니다.

VS200 시스템은 대물렌즈 NA의 75%인 조리개 구멍을 표준값으로 사용합니다. 대물렌즈의 NA가 높을수록 조리개의 구멍이 넓어집니다. 조리개를 대물렌즈 NA의 50%로 설정하는 등의 새로운 관찰 방법(OM)을 만들 수 있습니다.

그렇게 하려면 VS200-ASW 소프트웨어를 열고 ‘Device Customization’에 들어갑니다. BF 관찰 방법의 복사본을 만들고 이름을 붙이십시오.

마지막으로, 조리개(BX3 구경 조리개)의 값을 설정한 다음 관찰 방법을 저장합니다.

_{주의: 조리개를 바꾸면 새로운 광시야 관찰 방법의 음영(shading) 보정에 영향을 끼칠 수 있습니다.
음영 보정을 새로운 관찰 방법과 별개로 보정하십시오.}

응용 사례:

파파니콜라우(Papanicolaou) 테스트, 줄여서 팹(Pap) 테스트는 자궁 경관에 전암이나 암이 진행되고 있는지 감지하는 검사 방법입니다.

다음 이미지의 인체 팹 테스트 샘플은 헤마톡실린, 오렌지 G6, 에오신으로 염색되었습니다. 왼쪽 이미지는 조리개를 75% 열어 촬영했고, 오른쪽 이미지는 조리개를 50% 열어 촬영했습니다. 조리개 구멍이 작으면 샘플의 대비가 증가하면서 해상도가 약간 감소한다는 것이 이미지에서 나타납니다.

_{UPlanXAPO 20x 대물렌즈, 0.8 NA로 스캔한 이미지. 각각 표준 조리개 설정(75% 개방)으로, 해상도가 미미하게 손실되면서 대비가 증가한 50% 개방 조리개로 스캔함.}

결론:

VS200 시스템의 조절형 전동 조리개에는 사용자가 샘플을 최대로 활용할 수 있는 유연성이 있으며, 특히 샘플이 매우 희미하거나 대비가 부족할 때 효과적입니다. 이는 혈액학(hematological) 샘플과 옅게 염색한 면역조직화학(IHC) 염색 슬라이드에 적용할 수 있습니다.

_{* 조리개와 그 쓰임새에 대한 자세한 정보는 다음을 참고하십시오.
www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/java/kohler/contrast}