약제에 대한 반응–3D 세포 배양물의 내부 및 외부

세포 이미징을 통해 3D 세포 배양에 미치는 약제의 영향을 평가하였습니다.
스페로이드 같은 3D 세포 배양물의 내부 및 외부에 미치는 약제의 영향의 차이점을 조사하였습니다.

목적

최근에 스페로이드 같은 3D 세포 배양을 사용하여 약제에 대한 세포의 반응에 대한 연구가 진행되었습니다. 하지만 3D 세포 배양의 외부 및 내부에 대한 반응의 차이는 고려가 되지 않았습니다. 본 연구에서는 컨포칼 현미경을 사용하여 스페로이드의 심도 있는 관찰을 통해 차이를 조사하였습니다.

샘플 제공

Fucci는 이중 색상 배합을 사용하는 세포 주기 지표입니다. 유전자 이식 HT- 29 세포 발현 Fucci로 구성된 스페로이드는 10nM의 시스플라틴에 노출되었습니다. 96시간 동안 배양 후 시스플라틴이 포함된 배지를 세포 배양에서 제거한 후 회전 타원체를 4% 포르말린으로 고정시키고 투명화 시약으로 처리하였습니다.

결론
형광 이미지의 획득 및 분석

표면에서 150μm 심도까지 5μm마다 두께 증가 시 상기 스페로이드의 컨포칼 형광 이미지를 획득하였습니다. 분석 소프트웨어를 사용하여 각 레이어에서 빨간색(G0 및 G1 위상) 대 녹색(S, G2 및 M 위상)의 광도 비율을 분석하였습니다. 시스플라틴의 부재 시 외부와 내부 간 빨간색/녹색 비율에 큰 차이가 없었습니다(그림 1). 10nM의 시스플라틴이 있을 때 표면의 거리 증가 시 빨간색/녹색 비율이 증가하였습니다(그림 2 및 3).

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