생명과학 솔루션
애플리케이션 노트

파생 후 iPS 세포 군체의 정량화 밀도


유도 다능성 줄기(iPS) 세포는 그 응용 가능성으로 인해 계속해서 재생 의학 및 신약 개발 연구의 최전선에 있습니다. 연구 목적상 iPS 세포의 유지, 성장 및 준비의 워크플로에 많은 과정이 수반됩니다. 효율을 증가시키고 세포 죽음을 완화하기 위한 이러한 절차의 개선이 모든 줄기 세포 관련 연구의 발전에 필수적입니다. 비교적 최근에 해당하기는 하지만, 줄기 세포 연구는 사용자 경험 및 기술에 크게 좌우됩니다. 즉 인적 과오가 콜로니의 효능에 큰 역할을 합니다. iPS 세포의 컨플루언시를 표시하는 것은 콜로니 최적화, 분화 및 재현 가능한 결과 획득을 위한 가치 있는 도구입니다.

iPS 세포 연구의 예

iPS 세포 연구의 예

솔루션

그림 1. iPS 세포 콜로니의 이미지(좌측) 및 컨플루언시 측정의 결과(우측)
그림 1. iPS 세포 콜로니의 이미지(좌측) 및 컨플루언시 측정의 결과(우측)


iPS 세포 배양 유지 과정 중 Olympus CKX53 조직 배양 현미경에 의한 다중 이미지 획득을 통해 CKX-CCSW 소프트웨어는 정확한 컨플루언시 데이터를 제공할 수 있습니다. 6일간에 걸쳐 6웰 플레이트의 각기 다른 포인트에 3개, 6개 및 10개 이미지가 획득되었습니다. 이러한 이미지를 CKX-CCSW 소프트웨어로 가져와서 여기서 세포 및 배경이 처음으로 표시되었습니다(그림 1).

여기서부터 세포 및 배경이 전체 이미지에 걸쳐 파란색 및 녹색으로 표시되었으며 모든 이미지에 대해 컨플루언시가 계산되었습니다. 3개, 6개 및 10개 이미지 사용 시 1일, 3일 및 6일차에 평균 밀도 및 표준 편차가 계산되었습니다. 사용된 이미지의 수에 중요한 변화가 있음에도 불구하고 그림 2는 소수의 이미지에서 나온 결과도 정확한 성장 곡선을 야기할 수 있음을 보여줍니다.

그림 2. CKX-CCSW 소프트웨어를 사용한 iPS 세포의 콜로니 변화, 밀도의 기록
그림 2. CKX-CCSW 소프트웨어를 사용한 iPS 세포의 콜로니 변화, 밀도의 기록
 

그림 3. iPS 세포의 콜로니 컨플루언시의 성장 곡선(콜로니의 3개 이미지) 사용된 장치 및 소프트웨어: OLYMPUS CKX53 현미경, 카메라 DP22, CKX-CCSW 소프트웨어
대물렌즈: PLN2X (NA 0.06, WD 5.8mm) 관찰 방법: 명시야 
용기: 6웰 플레이트 
세포: 피더 비의존적 iPS 세포
제공 iPS PORTAL Inc.

그림 3. iPS 세포의 콜로니 컨플루언시의 성장 곡선(콜로니의 3개 이미지)

결론

CKX53 현미경과 결합하여 사용 시 Olympus CKX-CCSW 소프트웨어를 통해 배양 용기에서 iPS 세포의 콜로니를 애써 모으지 않고 콜로니 컨플루언시를 효율적으로 측정하고 기록할 수 있습니다. iPS 세포의 유지 배양 과정을 예시한 이 애플리케이션 노트에서는 100mm 접시와 24웰 플레이트*를 사용하여 iPS 세포를 추출한 후 많은 배양 과정에서 사용자 간의 차이 없이 데이터를 획득할 수 있음을 보여줍니다. 또한 정량적 데이터를 기록하고 저장하여 재현 가능성이 높은 세포 배양 과정을 지원합니다.

이 애플리케이션에 사용되는 제품

세포 밀도 측정기

CKX-CCSW

  • 무염색 배양 세포 및 세포 밀도 측정
  • 낮은 오염 위험
  • 빠르고 쉬운 작동
  • 정량 분석으로 세포 배양 과정 품질 향상
소형의 인체공학적 세포 배양 솔루션

CKX53

  • 중심 조정이 필요 없는 위상차
  • 반전 대비(IVC) 기술이 선명한 3D 보기를 제공합니다.
  • 3위치 슬라이더를 사용한 형광

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