골수 유래 중간엽 줄기세포의 1차 배양 원격 모니터링

실험 개요

골수 유래 중간엽 줄기세포는 다분화성입니다.따라서 재생의료용 세포의 근원으로서 활발한 연구와 임상 적용의 대상이 됩니다.골수액이나 골수 세포를 페트리 접시에 시딩하면 중간엽 줄기세포가 부착 세포로 증식합니다.그렇게 되면 부유하는 혈구로부터 중간엽 줄기세포를 분리할 수 있습니다.여기에서 우리는 Olympus Provi™ CM20 배양 모니터링 시스템을 사용하여 중간엽 줄기세포의 1차 배양 원격 모니터링 결과를 보고합니다.

실험 절차

상용화된 인간 골수 세포를 10%의 소태아혈청(FBS) 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 IMDM(Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium)을 사용하여 24웰 플레이트(Sumitomo Bakelite, Cat.No.MS-80240)에서 웰당 950,000개 세포/0.5mL의 밀도로 시딩했습니다. CM20 시스템을 사용하여 자동 초점으로 1시간마다 세포를 이미지화했습니다.배양 4일 차에 부착 세포의 증식이 관찰되었으므로 배지 교체 후 최대 6일 동안 모니터링했습니다.

결과

그림 1.골수 유래 중간엽 줄기세포의 1차 배양.화살표는 골수 유래 중간엽 줄기세포를 나타냅니다.

대부분의 세포는 혈구였으며 시딩 직후에는 중간엽 줄기세포가 관찰되지 않았습니다.그러나 시딩 후 4일 차에 중간엽 줄기세포가 방추체 형태로 나타났습니다.그 후에 배지를 교체하여 혈구를 제거했습니다.시딩 후 6일 차에는 중간엽 줄기세포가 다수의 세포로 증식하는 것을 확인했습니다.

배양 모니터링 시스템 평가값 사용 시의 이점

골수 유래 중간엽 줄기세포의 1차 배양은 부착 세포가 나타날 때까지 최대한 조심스럽게 실시해야 합니다.현미경 관찰이나 배지 교체 시 발생할 수 있는 흔들림을 최대한 방지해야 합니다.여기에서 우리는 CM20 시스템을 통해 배양 중인 세포를 원격으로 모니터링할 수 있음을 보여주었습니다.CM20 시스템을 사용하여 작업 시간을 단축하고 제때에 나머지 실험을 진행할 수 있었습니다.

감사의 글

이 애플리케이션 노트는 다음 연구원의 도움을 받아 작성되었습니다.

Takahiro Yamaguchi, PhD, ACEL, Inc.의 수석 연구원