Abbelight SAFe 시스템

응용 기술

넓은 시야에 걸친 높은 현지화 정밀도를 위한 ASTER 기술

SAFe 나노스코프는 조정 가능한 여기 영역의 적응형 스캐닝(ASTER) 기술을 기반으로 하는 동일한 고유 여기 시스템을 모두 공유합니다.¹ ASTER는 TIRF, HiLo 및 EPI 모드에서 균일한 조명을 생성하는 동시에 150 x 150 µm의 시야(FOV)에서 3D로 10–15 nm²에 이르는 현지화 정밀도로 지닌 PALM, STORM 또는 PAINT와 같은 SMLM 양식을 수행합니다.

ASTER의 개략도 및 그에 따른 조명 패턴

ASTER의 개략도 및 그에 따른 조명 패턴.

ASTER 조명 방법은 SMLM 및 TIRF 이미징을 위해 sCMOS 카메라의 전체 FOV를 활용하는 새로운 기능을 제공합니다.

ASTER는 두 개의 갈바노미터 거울을 사용하여 표본이 위치한 면에서 조명을 제어합니다.후면 초점면(BFP)에서 여기 빔이 위치를 유지하는 동안 검류계의 각도 회전은 표본이 위치한 면의 다른 위치에 해당하는 BFP에서 유사 각도를 유도합니다.

ASTER는 래스터 스캐닝과 같은 특정 패턴을 적용하면서 모든 여기 모드(EPI, HiLo 및 TIRF)에 최대 150 × 150 µm²의 조정 가능한 FOV에서 균일한 여기를 제공할 수 있습니다.

균일한 조명을 사용한 넓은 FOV TIRF 이미징

Olympus는 TIRF 현미경 분야의 선구자이며 당사의 TIRF 대물렌즈 범위는 60X에서 150X 범위의 배율로 TIRF 이미징에서 생성된 소멸파를 엄격하게 제어하도록 설계되었습니다.APON100XHOTIRF 대물렌즈는 NA가 1.7*로 세계에서 가장 높으며, UPLAPO60XOHR 및 UPLAPO100XOHR은 NA가 1.5*인 세계 최초의 플랜 Apochromat 대물렌즈입니다.*

Olympus의 광학과 Abbelight의 ASTER 조명 기술을 통해 사용자는 넓은 FOV에서 균일한 TIRF 조명을 얻을 수 있습니다.

_{*2018년 11월 기준.Olympus 연구 결과.}

_{스펙트린 세포골격이 염색되고 TIRF 현미경 모드에서 이미지화되고 배양된 해마 뉴런.Abbelight ASTER 기술을 사용하여 Hamamatsu Fusion sCMOS 카메라(카메라 포트 크기보다
큼)의 전체 시야에 걸쳐 단일적인 TIRF를 달성했습니다.샘플 제공: C.Leterrier, NeuroCytoLab, Marseille 및 Adrien Mau, ISMO, Orsay의 이미지.}

_{미세소관(알파-튜불린 항체) CF660, 미토콘드리아(항-TOMM20) CF680 및 염색질(EdU) AF647이 염색된 U2OS 세포.스펙트럼 디믹싱이 있는 동시 다색 2D dSTORM.}

스펙트럼 디믹싱: 단일 레이저, 단일 버퍼, 단일 획득을 사용한 다색 이미징

3D 나노스코피는 전례 없는 해상도를 달성하여 형광 현미경 분야에서 혁명을 일으켰지만 SMLM의 다색 이미징은 여전히 도전 과제로 남아있습니다.도전 과제는 색수차, 버퍼 선택 및 단일 분자 호환 염료 선택을 포함한 여러 요인으로 인해 발생합니다.

이러한 문제를 해결하기 위해 Abbelight는 SMLM을 위한 스펙트럼 디믹싱을 구현했습니다.스펙트럼 디믹싱은 다이크로익 큐브와 비율계량 알고리즘을 사용하여 원적외선 염료를 분리하여 SMLM에서 동시 다색 이미징을 수월하게 수행합니다.

참고 문헌

1: A.Mau, K.Friedl, C.Leterrier, N.Bourg, and S.Lévêque-Fort.고속 스캔 광시야 방식은 넓은 시야에서 최적화된 SMLM을 위해 조정 가능하며 균일한 조명을 제공합니다.Nature Communication.2020년 5월 21일.

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