Identificando fibras colágenas tipo I e III tingidas com Picrosirius Red usando um microscópio BX53 equipado com o LED de alta luminosidade e alto processamento de cores da Olympus

Para observar fibras colágenas, as amostras podem ser tingidas com tricrômica de Masson (MT), Elastica van Gieson (EVG) ou Elastica-Masson (E-M). Contudo, a distinção entre os tipos I e III de fibras colágenas não é possível com este método. Na pesquisa para descoberta de medicamentos, a avaliação quantitativa de fibras colágenas é necessária, por isso é importante poder distinguir entre os tipos I e III de fibras colágenas. Pesquisadores neste campo estão voltando sua atenção para a observação de luz polarizada de fibras colágenas tingidas com Picrosirius Red, pois este método possibilita a distinção necessária entre os dois tipos de fibras.

Problemas com a observação de luz polarizada de fibras colágenas tingidas com Picrosirius Red

Neste método, as fibras colágenas são identificadas pela cor de interferência, portanto a luz branca do dia é indispensável como cor de iluminação e o ajuste da intensidade da luz também é necessário para a observação visual. Na pesquisa para descoberta de medicamentos, as fibras colágenas contendo componentes de polarização devem ser detectadas seletivamente em contraste com um fundo escuro.
Na observação de luz polarizada, os colágenos de tipo I com fibra espessa aparecem como amarelo para laranja claros, enquanto o colágeno fino tipo III contendo fibra reticular aparece em verde. Uma lâmpada de halogênio comumente usada pode ser esmaecida usando um filtro ND ou controlando a voltagem. Com a primeira opção, contudo, o esmaecimento somente pode ser realizada de forma gradual (4 etapas), o que significa que o controle preciso é impossível. Com a segunda opção, a fibra colágena tipo III na cor de interferência verde não pode ser identificada devido ao componente de cores da lâmpada em amarelo para laranja ser mais forte do que o verde sob uma luz de baixa intensidade. Este efeito é demonstrado nas características espectrais a seguir.

Em geral, é difícil distinguir entre os tipos I e III de fibras colágenas e é um processo demorado com uma lâmpada de halogênio, resultando em baixa eficiência e precisão. Além disso, é desafiador realizar uma visualização microscópica usando observação de luz polarizada pois ela exige habilidades e conhecimentos especiais.

Vantagens da alta luminosidade de LED do microscópio BX53

Foi demonstrado recentemente que a observação de luz polarizada simples usando um microscópio BX53 equipado com o LED de alta luminosidade e alto processamento de cores da Olympus é eficaz para resolver esses problemas. Concebido com características espectrais que imitam uma lâmpada de halogênio de 100 W (9 V) usando um filtro de luz azul do dia (LBD) e fornecendo cor branca do dia consistentemente com qualquer intensidade de luz, o LED do microscópio BX53 permite a distinção entre os tipos I e III de fibras colágenas. A detecção com a observação de luz polarizada simples usando um microscópio BX53 e este LED de alta luminosidade permite uma observação fácil e ajuda a evitar problemas técnicos.

Tecido pulmonar de camundongo (tingido com Picrosirius Red)

Observação de campo claro

Observação de luz polarizada em contraste com um fundo escuro usando esmaecimento
Tipos I e III de colágeno são detectados em laranja e verde, respectivamente.

Figura 1: lâmpada de halogênio de 100 W

Figura 2: microscópio BX53 equipado com LED de alta luminosidade e alto processamento de cores

Avaliação quantitativa de fibras colágenas

Na pesquisa para descoberta de medicamentos, são necessárias a identificação de cada tipo de colágeno e avaliações quantitativas, como a de proporção. A Olympus fornece uma solução completa, combinando o microscópio BX53 equipado com o LED de alta luminosidade e alto processamento de cores com um sistema de formação de imagem. O uso de uma câmera DP74 em conjunto com o software de formação de imagem cellSens possibilita a extração automática de fibras colágenas e a medição das suas áreas e da sua proporção com base na informação das cores das imagens da amostra.

*Vermelho mostra o colágeno tipo Ⅰ, verde mostra o colágeno tipo III

O LED de alta luminosidade do BX53 auxilia em pesquisas para descoberta de medicamentos eficientes

O microscópio BX53 equipado com o seu LED de alta luminosidade e alto processamento de cores fornece uma cor branca do dia consistente com qualquer intensidade de luz e com as características espectrais equivalentes a uma lâmpada de halogênio de 100 W, possibilitando a identificação de fibras colágenas dos tipos I e III tingidas com Picrosirius Red. For simple polarized light observation, you will need analyzer for transmitted light (U-ANT) and polarizer (U-POT).
Um sistema que combina o microscópio BX53 com a sua avançada tecnologia de LED, a câmera digital DP74 e o software de formação de imagem cellSens com a solução Contagem e Medição podem ser usados para realizar avaliações quantitativas precisas de cada tipo de fibra colágena, o que é uma função essencial para a pesquisa para descoberta de medicamentos.