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Notas de aplicação

Avaliação da qualidade celular com o sistema de monitoramento de incubação CM20: melhorar a reprodutibilidade dos experimentos através da caracterização de células


Introdução

Em pesquisas onde são usadas células cultivadas, conseguir a reprodutibilidade dos experimentos é muitas vezes um desafio. Para superar esse problema, são propostas como contramedidas “traçados experimentais mais fortes” e “melhores estatísticas”.*1 Contudo, a aquisição dos dados quantitativos que é necessária para implementar tais medidas é uma sobrecarga para os pesquisadores. Nesta nota de aplicação, apresentamos uma abordagem para melhorar a reprodutibilidade dos experimentos através da aquisição de dados quantitativos em culturas usando o sistema CM20, diminuindo assim a responsabilidade de coletar dados colocada sobre os pesquisadores.

Problemas convencionais: dificuldade de obtenção de dados quantitativos na etapa de preparação de culturas

Geralmente, a avaliação da qualidade e o tempo efetivo da cultura de células, que é a etapa preliminar do experimento, são confiados à avaliação subjetiva do operador, o que contribui para uma variação considerável dos resultados entre operadores. Além disso, ao coletar dados quantitativos de células, é necessário selecionar uma parte da amostra e há uma falta de ferramentas práticas para medir de forma não destrutiva uma grande quantidade de dados.

Nossa solução: aquisição de dados quantitativos usando o sistema de monitoramento de incubação CM20

Uma vez que o sistema de monitoramento de incubação CM20 pode observar automaticamente a amostra celular em intervalos estáveis sem a remoção do recipiente, é possível adquirir dados quantitativos sem intervenção do pesquisador nem o risco de desestabilizar o ambiente da cultura de células. É também possível medir automaticamente o número de células a partir da imagem adquirida e calcular o tempo de duplicação, que é um indicador da capacidade de proliferação celular.

Fig. 1 O CM20 pode medir automaticamente dados quantitativos durante a passagem de células semeadas em uma placa de 6 poços

Fig. 1 O CM20 pode medir automaticamente dados quantitativos durante a passagem de células semeadas em uma placa de 6 poços

Experimento de verificação de reprodutibilidade melhorada: relação entre características das células durante a passagem usando CEVUHs e indução de diferenciação

A seguir, um exemplo do uso bem-sucedido dos dados quantitativos da passagem celular como uma avaliação da qualidade.

Fig. 2 Aquisição de imagens MSC e contagem de células com o CM20

Fig. 2 Aquisição de imagens MSC e contagem de células com o CM20

Experimento de verificação de reprodutibilidade melhorada: relação entre características das células durante a passagem usando CEVUHs e indução de diferenciação

A seguir, um exemplo do uso bem-sucedido dos dados quantitativos da passagem celular como uma avaliação da qualidade. A morfologia das células e o tempo de duplicação foram analisados a partir de um grande número de imagens que foi adquirido durante a subcultura de células endoteliais da veia umbilical humana (CEVUHs). As nossas descobertas indicam que existe uma alta correlação entre o tempo de duplicação das CEVUHs durante a subcultura e o respectivo potencial angiogênico. Neste caso, foi demonstrado que é possível traçar experimentos com alta reprodutibilidade usando até a Passagem 8 (P8), que é o momento em que ocorrem alterações na capacidade de proliferação.

(Este resultado foi obtido usando o protótipo do sistema CM20. Consulte o artigo da Scientific Reports para obter detalhes sobre o experimento*2)

Fig. 3 (a) Morfologia das células por número de passagem: registro de dados de imagem em cada passagem, (b) Relação entre o número da passagem e a taxa de crescimento: demonstra que a taxa de proliferação muda na P8, (c) Potencial angiogênico e número de passagem de CEVUH: demonstra angiogênese bem-sucedida na P7 e fraca angiogênese na P12

Fig. 3 (a) Morfologia das células por número de passagem: registro de dados de imagem em cada passagem, (b) Relação entre o número da passagem e a taxa de crescimento: demonstra que a taxa de proliferação muda na P8, (c) Potencial angiogênico e número de passagem de CEVUH: demonstra angiogênese bem-sucedida na P7 e fraca angiogênese na P12

Depoimentos

Junji Fukuda

No campo das ciências da vida, é um problema quando os experimentos realizados no passado não podem ser reproduzidos. Com os métodos convencionais, os especialistas no laboratório tinham de identificar visualmente pequenas alterações durante a subcultura, mas ao usar um sistema de monitoramento recentemente desenvolvido, foi possível adquirir uma grande quantidade de imagens e analisar os dados para determinar a qualidade das células. No futuro, em campos das ciências da vida como a medicina regenerativa, esperamos melhorar a reprodutibilidade dos experimentos através da aquisição de dados durante a cultura e da avaliação da qualidade.

Prof. Junji Fukuda
Divisão de Ciência de Materiais e Engenharia
Faculty of Engineering, Chemical Engineering and Life Science, 
Yokohama National University

Referências

*1) Monya Baker, “1,500 scientists lift the lid on reproducibility”, nature 533, 452–454 (26 de maio de 2016) 
*2) Tatsuya Osaki, Tatsuto Kageyama, Yuka Shimazu, Dina Mysnikova, Shintaro Takahashi, Shinichi Takimoto & Junji Fukuda, “Flatbed epi relief-contrast cellular monitoring system for stable cell culture”, nature Scientific Reports ISSN 2045-2322 (online) (15 de maio de 2017)

Produtos usados nesta aplicação

Incubation Monitoring System

CM20

Remotely monitor, analyze, and share your cell cultures’ health, cell count, and confluency using the reliable quantitative data provided by the automated CM20 incubation monitoring system. The system enables label-free observation, reduces the risk of damage to your cultures, and standardizes your culture workflow.

  • Automatically collects quantitative data on the health and confluency of your cultures
  • Monitor, analyze, and share your cultures' progress remotely from a PC or tablet
  • Equipped with oblique epi-illumination for label-free observation
Sistema de monitoramento de incubação

CM30

Monitore, analise e compartilhe remotamente a integridade, a contagem de células e a confluência da sua cultura de células usando os dados quantitativos confiáveis fornecidos pelo sistema de monitoramento de incubação CM30 automatizado. O sistema possibilita uma observação sem marcação, reduz o risco de danos às suas culturas e padroniza o seu fluxo de trabalho de cultura.

  • Coleta automaticamente dados quantitativos sobre a integridade e confluência das suas culturas
  • Monitore, analise e compartilhe o progresso da sua cultura remotamente através de um PC ou tablet
  • Equipado com epi-iluminação oblíqua para proporcionar uma observação sem marcação

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