Evident LogoOlympus Logo
Notas de aplicação

Monitoramento do efeito de componentes do meio no crescimento e diferenciação de organoides de divertículo hepático derivados de células iPS humanas usando o sistema de monitoramento de incubação Olympus Provi™ CM20


Introdução

Em pesquisas da biologia do desenvolvimento, os organoides são usados para compreender a organogênese. Já em pesquisas de descoberta de medicamentos, eles servem para elucidar o mecanismo patogênico de doenças e encontrar um tratamento eficaz. A otimização das condições de cultura, como fatores de crescimento e compostos de moléculas pequenas, é essencial para uma cultura bem-sucedida de organoides. Hoje em dia, as condições ideais de cultura são obtidas por tentativa e erro, sendo importante observar cuidadosamente as alterações no comportamento e na morfologia das células cultivadas sob diferentes condições. Nesta nota de aplicação, mostramos como o Olympus Provi™ CM20 fornece resultados qualitativos que são cruciais para estabelecer as condições ideais de cultura para organoides hepáticos.

Delineamento experimental

A criação de organoides hepáticos derivados de células iPS humanas apresentou valor potencial em diversos cenários (Koido M et al., Nature Medicine 2020 (PMID: 32895570), Takebe T et al., Nature 2013 (PMID: 23823721)). Para este experimento, organoides de divertículo hepático foram diferenciados das células iPS humanas em um sistema de cultura tridimensional. O experimento foi desenhado para testar cinco condições diferentes nas quais os componentes do meio foram modificados para alterar os estágios posteriores de diferenciação do divertículo hepático (sinalizadas aqui pelas letras A, B, C, D e E). A diferenciação e morfologia dos organoides foram analisadas a fim de estabelecer o efeito dos diferentes compostos e encontrar a condição ideal de cultura. O sistema de monitoramento de incubação CM20 foi usado para adquirir informações sobre os organoides cultivados em 3D colocados em uma placa de 24 poços por um período de cerca de 2 semanas (Figura 1).

Figura 1. Visão geral das condições experimentais

Resultados

Sob a condição A já estabelecida, observou-se a formação de organoides esféricos e o desenvolvimento gradual de estruturas auto-organizadas. Nas condições B e C, observou-se a formação de organoides morfologicamente semelhantes aos formados sob a condição A. Por outro lado, a aplicação das condições D e E levou a um aumento no diâmetro e na quantidade de organoides (Figura 2). Os dados temporais obtidos com o sistema CM20 também revelaram que a dilatação luminal observada sob as condições D e E ocorreu aproximadamente 4 a 5 dias após a adição do composto (Figura 3).

Figura 2. Observação de organoides de divertículo hepático humano cultivados em uma placa multipoços e expostos a cinco diferentes compostos pequenos que afetaram sua diferenciação e crescimento

Figura 3. Alterações morfológicas em organoides de divertículo hepático humano em resposta à adição de compostos

Conclusão

Verificou-se que é possível monitorar o estado de organoides tridimensionais cultivados em placas multipoços com o passar do tempo e fazer observações comparativas entre as condições usando o sistema de monitoramento CM20.


Comentários dos Drs. Takebe e Yoneyama

Dr. Takanori Takebe (à esquerda) Dr. Yosuke Yoneyama (à direita) do Tokyo Medical and Dental University Institute of Research.

Embora seja importante analisar a expressão de marcadores moleculares ao avaliar a eficiência da diferenciação de organoides, as alterações morfológicas em organoides também podem ser indicadores úteis da qualidade desses organoides e de resultados futuros. Com o sistema CM20, não perdemos o momento em que ocorrem as mudanças morfológicas pois há um monitoramento constante do estado dos organoides.

Produtos usados nesta aplicação

Incubation Monitoring System

CM20

Remotely monitor, analyze, and share your cell cultures’ health, cell count, and confluency using the reliable quantitative data provided by the automated CM20 incubation monitoring system. The system enables label-free observation, reduces the risk of damage to your cultures, and standardizes your culture workflow.

  • Automatically collects quantitative data on the health and confluency of your cultures
  • Monitor, analyze, and share your cultures' progress remotely from a PC or tablet
  • Equipped with oblique epi-illumination for label-free observation
Sistema de monitoramento de incubação

CM30

Monitore, analise e compartilhe remotamente a integridade, a contagem de células e a confluência da sua cultura de células usando os dados quantitativos confiáveis fornecidos pelo sistema de monitoramento de incubação CM30 automatizado. O sistema possibilita uma observação sem marcação, reduz o risco de danos às suas culturas e padroniza o seu fluxo de trabalho de cultura.

  • Coleta automaticamente dados quantitativos sobre a integridade e confluência das suas culturas
  • Monitore, analise e compartilhe o progresso da sua cultura remotamente através de um PC ou tablet
  • Equipado com epi-iluminação oblíqua para proporcionar uma observação sem marcação

foi adicionado com sucesso aos seus favoritos

Visualizar favoritosFechar

Maximum Compare Limit of 5 Items

Please adjust your selection to be no more than 5 items to compare at once

Sorry, this page is not
available in your country.

Desculpe, esta página não está disponível em seu país