Identificando cirrose no tecido hepático usando um escâner de lâminas depesquisa

Introdução

A cirrose, também conhecida como cirrose do fígado ou cirrose hepática, é uma condição em que o fígado funciona de forma inadequada devido a danos a longo prazo. Esse dano é caracterizado pela substituição do tecido hepático normal por tecido cicatricial. Normalmente, a doença se desenvolve lentamente ao longo de meses ou anos. No início, muitas vezes não há sintomas.

A cirrose é comumente causada por consumo de álcool, hepatite B, hepatite C e doença hepática gordurosa não alcoólica.

Um fator de diagnóstico é a quantidade de fibras de colágeno dentro do tecido hepático. Métodos especiais de coloração podem ser usados para destacar essas fibras para análise de imagem.

Experimento

Biópsias de fígado de camundongos foram feitas e imobilizadas em uma lâmina de vidro. Em seguida, o tecido foi tingido com Picro-Sirius-Red e Fast-Green para realçar o tecido fibroso.

A coloração Pico-Sirius-Red e Fast-Green é uma variante da coloração Pico Sirius Red, onde um contra-corante do tecido circundante com Fast Green é realizada para destacar melhor as fibras de colágeno tingidas de vermelho.

Em histologia, a coloração Sirius Red é usada em vários domínios de diagnóstico para observar níveis de fibrose em muitos casos de inflamação induzida por câncer, patologias vasculares ou metabólicas.

Usando microscopia de campo claro, o seguinte pode ser observado:

As imagens das lâminas tingidas foram adquiridas com um escâner de lâmina de pesquisa Olympus SLIDEVIEW™ VS200 com ampliação de 40x usando uma lente objetiva UPlanXApo de 40x com uma AN de 0,95 para obter a melhor resolução possível (0,17 μm/pixel).

_{Tecido hepático de camundongo. Espessura: 4 μm, coloração: Picro-Sirius-Red e Fast-Green (Labor: Medizinische Universität Wien, Innere Medizin III, HEPEX Labor für Portale Hypertension und Fibrose bei Lebererkrankungen, Áustria)}
 

No entanto, a lente objetiva UPlanXApo 40x tem uma profundidade de foco de apenas 0,82 μm. Como as seções de tecido hepático são finas (cerca de
4 μm), a aplicação do algoritmo de formação de imagem focal estendida (EFI) também melhora a qualidade da imagem em termos de foco.

A EFI permite que você adquira imagens com profundidade de foco praticamente ilimitada. Para isso, o software calcula
uma imagem de compósitos nítida em todas as áreas a partir de muitas imagens com foco diferente.

O processo de aquisição de imagens primeiro adquire uma pilha Z e, em seguida, calcula uma imagem EFI da pilha Z.

A ilustração abaixo mostra vários quadros que foram adquiridos em diferentes posições Z. Em cada um desses quadros, existem apenas alguns segmentos de imagem com foco nítido. Esses segmentos são mostrados em cores e os segmentos de imagem com foco nítido serão montados na imagem EFI.

_{Tecido hepático de camundongo: (a) imagem-fonte, (b) ajuste manual do limite (azul) para o tecido tingido de verde, (c) ajuste manual do limite (amarelo) para as fibras tingidas de vermelho
e (d) limite combinado das duas fases}
 

_{A análise pode ser realizada em toda a seção do fígado de camundongo}