A tecnologia de reprodução assistida (ART) refere-se a procedimentos e tratamentos usados para tratar a infertilidade. A Olympus oferece diferentes tipos de microscópios para dar suporte a uma variedade de aplicações de pesquisa em tecnologia de reprodução assistida, tais como:

• Microscópios estéreo para limpeza de oócitos, congelamento de oócitos e observação de descongelamento de embriões
• Microscópios verticais para observação de espermatozoide
• Microscópios invertidos que suportam o processo de trabalho de injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) e injeção intracitoplasmática de espermatozoides morfologicamente selecionados (IMSI) e observação de spindle

Ajustar adequadamente seu microscópio para essas tarefas pode melhorar a qualidade das imagens observadas. Para apoiar seu trabalho, esta nota de aplicação compartilhará cinco ajustes básicos do microscópio para ajudar a otimizar suas observações diárias e processo de trabalho. Observe que os procedimentos abaixo se concentram em microscópios invertidos e microscópios estereoscópicos da Olympus comumente usados.
 

1. Ajuste do eixo óptico

Para ajustar o eixo óptico em um microscópio invertido IX73 ou IX83, siga estas etapas:

1. Mova a alavanca do diafragma de íris de abertura do condensador para a posição mais à esquerda para abrir o diafragma.
2. Mova a alavanca do diafragma de íris de campo do pilar de iluminação para a posição mais à esquerda para abrir o diafragma.
3. Focalize a amostra usando uma lente objetiva de 10X.
4. Mova a alavanca do diafragma de íris de campo ligeiramente para a direita para parar o diafragma de íris de campo para que a imagem fique no campo de visão. (A Figura 2a mostra a visão através da ocular.)
5. Gire a haste do condensador que se move para cima e para baixo para focar na imagem do diafragma de íris de campo.
   Certifique-se de que você pode ver o polígono claramente (Figura 2b).
6. Insira as duas chaves de fenda hexagonais acopladas nos orifícios dos parafusos de ajuste. Gire o parafuso de centralização do condensador para movê-lo para o centro do campo de visão (Figura 2c).
7. Abra a alavanca do diafragma de íris de campo até que a imagem esteja fora do campo de visão.

Usando o sistema CM20, testamos se é possível observar o processo de cultura de organoides hepáticos que se diferenciam e crescem em Matrigel de maneira tridimensional.^*1

Figura 1: Microscópio IX73 com um condensador manual IX2-MLWCD

2. Ajuste de distância interpupilar

O ajuste da distância interpupilar modifica a largura entre as oculares para a largura dos olhos do observador para uma observação clara. Ajustar adequadamente a distância interpupilar permite que você veja uma imagem clara através das oculares. Se você olhar pelas oculares e vir duas imagens, então a distância interpupilar deve ser ajustada.

Para ajustar a distância interpupilar em um microscópio invertido IX73 ou IX83 ou em um estereomicroscópio SZX10 ou SZX16, siga estas etapas:

1. Olhe pela ocular na posição correta do pontos das oculares (Figura 3) enquanto foca seus olhos na espécime. Para observar de forma confortável, seus olhos precisam estar a uma certa distância da ocular. Ao usar óculos, certifique-se de que eles toquem o vidro das oculares. A olho nu, encoste os olhos nos protetores oculares de borracha acoplados às oculares.

   
   Figura 3

2. Alargue ou reduza as larguras dos olhos das oculares esquerda e direita horizontalmente para que os campos de visão esquerdo e direito apareçam como uma única imagem no meio. Aproxime os olhos da ocular enquanto observa essa única imagem. Repita este ajuste para que o olho direito, o olho esquerdo e ambos os olhos possam ver o mesmo campo de visão.

   
   Figura 4

3. Ajuste de dioptrias

O ajuste de dioptrias corrige a diferença entre o campo de visão esquerdo e direito e minimiza a mudança de foco devido à troca da lente objetiva. Como a dioptria varia entre os indivíduos, o ajuste de dioptrias é necessário para cada usuário.

Para ajustar a dioptria no microscópio invertido IX73 ou IX83, siga estas etapas:

1. Defina a escala do anel de ajuste de dioptrias em ambos os lados para a posição "0".

   
   Figura 5

2. Insira uma lente objetiva de baixa ampliação (por exemplo, 10X) na trajetória óptica. Olhe para a ocular direita com o olho direito e focalize a espécime com o ajuste do movimento macro.
3. Insira uma lente objetiva de baixa ampliação (por exemplo, 10X) na trajetória óptica novamente. Enquanto observa a espécime com o olho direito, gire apenas o anel de ajuste de dioptrias no lado direito (lado do tubo de observação: a parte irregular na Figura 6a) para focalizar a espécime.

   
   Figura 6

4. Olhe pela ocular esquerda com o olho esquerdo e gire apenas o anel de ajuste de dioptrias (Figura 6b) no lado esquerdo (o lado da ocular) para focalizar a espécime.

4. Ajuste do colar de correção em uma lente objetiva

Devido à influência da superfície inferior de um recipiente de espécime, pode ocorrer aberração esférica (um erro óptico em que a luz não se acumula em um ponto no eixo óptico) na imagem observada. Isso pode fazer com que a imagem fique pouco nítida. O papel do colar de correção em uma lente objetiva é reduzir essa aberração.

Figura 7

As objetivas da Olympus são projetadas opticamente para uma espessura de recipiente de 1,5 mm, que é a espessura típica de uma lamínula. Isso significa que quando o colar de correção da objetiva é definido para uma posição de 1,5, a espessura total do fundo da placa de aquecimento e do recipiente deve ser de 1,5 mm. Essa espessura total permite que você tire o máximo proveito da sua objetiva.

Para atender a esses requisitos específicos de espessura, escolha cuidadosamente uma placa de aquecimento que funcione com seu recipiente de espécime. Para uma placa de plástico com uma espessura de 1 mm, escolha uma placa de aquecimento com uma espessura de 0,5 mm. Para uma placa com fundo de vidro com uma espessura de 0,17 mm, escolha uma placa de aquecimento com uma espessura de 1,3 mm.

Você também pode definir o colar de correção da lente objetiva de acordo com a espessura combinada da placa de aquecimento e a espessura do recipiente (ao usar o microscópio invertido IX73). Eis dois exemplos:

Exemplo 1: quando a placa de aquecimento tem 0,5 mm de espessura e o prato com fundo de vidro tem 0,17 mm de espessura, combine as espessuras (0,5 + 0,17 mm = 0,67 mm) e ajuste o colar de correção para a posição de 0,67 mm (Figura 8).

Figura 8

Exemplo 2: quando a placa de aquecimento tem 0,5 mm de espessura e a placa de plástico tem 1 mm de espessura, combine as espessuras (0,5 + 1 mm = 1,5 mm) e ajuste o colar de correção para a posição de 1,5 mm (Figura 9).

Figura 9

5. Ajuste parfocal do zoom

O ajuste parfocal do zoom evita problemas de desfocagem ao alternar entre baixa e alta ampliação. Se esse ajuste for feito corretamente, você não precisará ajustar o foco toda vez que mudar a ampliação durante o trabalho, como a limpeza do oócito. Isso pode melhorar a eficiência do trabalho.

Para ajustar o foco do zoom em um microscópio estereoscópico SZX10 ou SZX16, siga estas etapas:

1. Ajuste o botão do zoom para o lado de ampliação mínima e focalize com o botão de movimento macro.
2. Mova gradualmente o botão do zoom para o lado de alta ampliação e focalize com o botão de movimento fino, depois levante-o para a ampliação máxima e foco.
3. Retorne o botão do zoom para o lado de baixa ampliação. Se a visualização estiver fora de foco, gire o anel de ajuste de dioptrias das oculares esquerda e direita para focalizar.
4. Novamente, defina o botão do zoom para o lado de ampliação máxima e verifique se a visualização está em foco. Se estiver fora de foco, repita os passos dois e três. O ajuste do foco do zoom é concluído quando as ampliações mínima e máxima estiverem em foco.
5. Ajuste a largura do olho para que ambos os olhos possam ver um único campo de visão.

   
   Figura 10