Soluções para ciências da vida
Notas de aplicação

Descobrindo estruturas neurovasculares finas na epífise tibial usando o microscópio FLUOVIEW FV3000


Aquisição de imagens de estruturas teciduais finas e complexas reduzindo o branqueamento

A aquisição de imagens de vasos sanguíneos e nervos sensoriais na epífise de uma articulação do joelho é difícil porque os nervos e os vasos formam uma estrutura complexa em uma área estreita. Graças à sua alta eficiência de transmissão, o microscópio confocal de varredura a laser FLUOVIEW FV3000 permite a aquisição de imagens claras e de alta resolução de estruturas finas, usando uma baixa potência do laser, o que auxilia na redução do fotobranqueamento da amostra. Usando essa capacidade do microscópio FV3000, foi possível adquirir com êxito as imagens de uma estrutura 3D complexa dos nervos sensoriais e sua vasculatura envolvente penetrando em um forame na epífise tibial.

Figura 1: Nervos sensoriais e vasculatura envolvente penetram em um forame na epífise tibial (imagem 3D) Nervos sensoriais (EYFP, ciano), vasos sanguíneos (Alexa Fluor 594, magenta), núcleos (DAPI, laranja)

Figura 1: Nervos sensoriais e vasculatura envolvente penetram em um forame na epífise tibial (imagem 3D)
Nervos sensoriais (EYFP, ciano), vasos sanguíneos (Alexa Fluor 594, magenta), núcleos (DAPI, laranja)


Equipamento de aquisição de imagens
Microscópio: sistema FLUOVIEW FV3000
Objetiva: objetiva de imersão em óleo de 100x (UPLSAPO100XO)


Descoberta de estruturas neurovasculares na epífise tibial

A compreensão das projeções vasculares e neuronais na articulação do joelho é importante para o alívio da dor em casos de artropatia do joelho. Contudo, até agora, os pesquisadores não conseguiam observar totalmente as estruturas finas formadas por nervos sensoriais e vasos sanguíneos ao longo da articulação do joelho. Com o microscópio FV3000, essas estruturas são claramente visíveis pela primeira vez. Observou-se que os nervos sensoriais na articulação do joelho existem não só no menisco, mas também na epífise tibial. Esses nervos sensoriais encontram-se interligados com os vasos sanguíneos envolventes e, em conjunto, a estrutura neurovascular penetra em um forame na epífise tibial.

Referência: Koichi Matsuo, et al.“Innervation of the tibial epiphysis through the intercondylar foramen.” Bone, 120 (2019) 297–304

Figura 2: Forame neuronal e vascular
Figura 2: Forame neuronal e vascular


Como o microscópio confocal FV3000 facilitou nosso experimento

O detector TruSpectral altamente sensível adquire imagens com fototoxicidade baixa

O detector TruSpectral está equipado com grades de difração do tipo de transmissão capazes de transmitir sinais fluorescentes com uma eficiência superior a 40%, quando comparado a grades de difração do tipo refletivo convencionais. Graças à transmissão avançada, é necessária uma menor potência do laser para adquirir imagens, reduzindo, desta forma, a fototoxicidade.

Aquisição de imagens de alta relação sinal-ruído sob uma luz de excitação baixa

O tubo fotomultiplicador (PMT) GaAsP incorpora até quatro canais com uma eficiência quântica máxima de 45%, permitindo que os usuários visualizem amostras muito escuras que não podiam ser visualizadas em equipamentos convencionais. O resfriamento Peltier reduz o ruído de fundo em 20% para imagens de alta relação sinal-ruído sob uma luz de excitação excepcionalmente baixa.


Comentário do Dr. Katsuhiro Kawaai

Dr. Katsuhiro Kawaai

Para a aquisição de imagens de uma estrutura 3D fina e complexa de neurites em uma área estreita, foi necessário uma objetiva de imersão em óleo de 100x com uma abertura numérica (AN) alta; porém, o fotobranqueamento causado por uma potência do laser concentrada representava uma preocupação. Felizmente, graças à alta sensibilidade do microscópio FV3000, conseguimos manter uma potência do laser baixa, obtendo imagens de alta resolução de 50 planos Z em intervalos de 0,45 μm sem fotobranqueamento da nossa amostra.


Agradecimentos
Esta nota de aplicação foi preparada com a ajuda dos seguintes pesquisadores:
Dr. Katsuhiro Kawaai e Dr. Koichi Matsuo, Laboratório de Tecnologia Celular e Tecidual, Escola de Medicina da Universidade de Keio

Produtos usados nesta aplicação

Microscópio de escaneamento a laser confocal

FV3000

  • Disponível para configurações de escâner híbrido galvanômetro/ressonante (FV3000RS) ou apenas galvanômetro (FV3000)
  • Detecção TruSpectral extremamente precisa e eficiente em todos os canais
  • Otimizado para imagem de célula viva com alta sensibilidade e baixa fototoxicidade
  • Inverted and upright frame options to suit a variety of applications and sample types
Objetivas apocromáticas estendidas

UPLXAPO

  • Grande abertura numérica, nivelamento de imagem homogêneo e compensação de aberração cromática de 400 nm a 1.000 nm.
  • Imagem de precisão altamente confiável para aplicações amplas de microscopia de campo claro/fluorescência a microscopia confocal/superresolução.

foi adicionado com sucesso aos seus favoritos

Visualizar favoritosFechar

Maximum Compare Limit of 5 Items

Please adjust your selection to be no more than 5 items to compare at once

Sorry, this page is not
available in your country.