Descobrindo estruturas neurovasculares finas na epífise tibial usando o microscópio FLUOVIEW FV3000
Aquisição de imagens de estruturas teciduais finas e complexas reduzindo o branqueamento
A aquisição de imagens de vasos sanguíneos e nervos sensoriais na epífise de uma articulação do joelho é difícil porque os nervos e os vasos formam uma estrutura complexa em uma área estreita. Graças à sua alta eficiência de transmissão, o microscópio confocal de varredura a laser FLUOVIEW FV3000 permite a aquisição de imagens claras e de alta resolução de estruturas finas, usando uma baixa potência do laser, o que auxilia na redução do fotobranqueamento da amostra. Usando essa capacidade do microscópio FV3000, foi possível adquirir com êxito as imagens de uma estrutura 3D complexa dos nervos sensoriais e sua vasculatura envolvente penetrando em um forame na epífise tibial.
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Figura 1: Nervos sensoriais e vasculatura envolvente penetram em um forame na epífise tibial (imagem 3D)
Nervos sensoriais (EYFP, ciano), vasos sanguíneos (Alexa Fluor 594, magenta), núcleos (DAPI, laranja)
Equipamento de aquisição de imagens
Microscópio: sistema FLUOVIEW FV3000
Objetiva: objetiva de imersão em óleo de 100x (UPLSAPO100XO)
Descoberta de estruturas neurovasculares na epífise tibial
A compreensão das projeções vasculares e neuronais na articulação do joelho é importante para o alívio da dor em casos de artropatia do joelho. Contudo, até agora, os pesquisadores não conseguiam observar totalmente as estruturas finas formadas por nervos sensoriais e vasos sanguíneos ao longo da articulação do joelho. Com o microscópio FV3000, essas estruturas são claramente visíveis pela primeira vez. Observou-se que os nervos sensoriais na articulação do joelho existem não só no menisco, mas também na epífise tibial. Esses nervos sensoriais encontram-se interligados com os vasos sanguíneos envolventes e, em conjunto, a estrutura neurovascular penetra em um forame na epífise tibial.
Figura 2: Forame neuronal e vascular
Como o microscópio confocal FV3000 facilitou nosso experimento
O detector TruSpectral altamente sensível adquire imagens com fototoxicidade baixa
O detector TruSpectral está equipado com grades de difração do tipo de transmissão capazes de transmitir sinais fluorescentes com uma eficiência superior a 40%, quando comparado a grades de difração do tipo refletivo convencionais. Graças à transmissão avançada, é necessária uma menor potência do laser para adquirir imagens, reduzindo, desta forma, a fototoxicidade.
Aquisição de imagens de alta relação sinal-ruído sob uma luz de excitação baixa
O tubo fotomultiplicador (PMT) GaAsP incorpora até quatro canais com uma eficiência quântica máxima de 45%, permitindo que os usuários visualizem amostras muito escuras que não podiam ser visualizadas em equipamentos convencionais. O resfriamento Peltier reduz o ruído de fundo em 20% para imagens de alta relação sinal-ruído sob uma luz de excitação excepcionalmente baixa.
Comentário do Dr. Katsuhiro Kawaai
 | Para a aquisição de imagens de uma estrutura 3D fina e complexa de neurites em uma área estreita, foi necessário uma objetiva de imersão em óleo de 100x com uma abertura numérica (AN) alta; porém, o fotobranqueamento causado por uma potência do laser concentrada representava uma preocupação. Felizmente, graças à alta sensibilidade do microscópio FV3000, conseguimos manter uma potência do laser baixa, obtendo imagens de alta resolução de 50 planos Z em intervalos de 0,45 μm sem fotobranqueamento da nossa amostra. |
Agradecimentos
Esta nota de aplicação foi preparada com a ajuda dos seguintes pesquisadores:
Dr. Katsuhiro Kawaai e Dr. Koichi Matsuo, Laboratório de Tecnologia Celular e Tecidual, Escola de Medicina da Universidade de Keio
Produtos usados nesta aplicação
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