Resposta ao tratamento com medicamentos — Análise do ciclo celular de culturas de células 3D

O efeito de medicamentos anticâncer em culturas de células 3D pode ser avaliado por meio de imagens celulares.
Em combinação com o indicador de ciclo celular Fucci, é possível investigar o efeito de um medicamento anticâncer no ciclo celular.

Objetivos

Recentemente, além das culturas convencionais de células 2D, as culturas de células 3D foram usadas no estudo mecanístico de medicamentos anticâncer. Neste estudo, foi analisada a resposta das culturas de células 3D a medicamentos em termos de ciclo celular, bem como de morte celular.

Preparação de amostras

Fucci é um indicador de ciclo celular que usa um esquema de cor dupla. Foi semeada uma suspensão de células HT-29 transgênicas expressando Fucci em uma placa de 96 poços de fundo em U. As culturas de células foram expostas à cisplatina diluída em série (0–10 nM) 72 horas após o início da cultura de células. Depois da incubação por 96 horas, o meio contendo cisplatina foi removido das culturas de células, e elas foram fixadas em formalina a 4%.

Conclusão
Aquisição e análise de imagens fluorescentes

Foram obtidas imagens fluorescentes confocais de culturas de células 3D por meio do uso combinado do sistema de análise de imagens celulares (Ex: 488 nm e 561 nm). Os dados de luminosidade da fluorescência foram tratados com projeção de intensidade máxima seguida da identificação dos núcleos com software de análise e contagem de células. O número de células HT-29 em esferoides 96 horas após a adição de cisplatina é mostrado na Figura 1. A análise da sinalização de cor dupla indicou que o tratamento das culturas de células 3D com cisplatina resultou na redução das fases G0 e G1 do ciclo celular, bem como do número de células (Figuras 2 e 3).

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