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Notas de aplicação

Avaliação da eficácia de medicamentos — Avaliação quantitativa do tamanho do esferoide


A eficácia do medicamento anticâncer 5-FU foi avaliada por meio da quantificação da área em corte transversal dos esferoides com base na análise de imagens de campo claro com o sistema.

Objetivos

Recentemente, os esferoides tumorais 3D foram considerados úteis como modelos in vitro de tumores sólidos. A alteração no tamanho dos esferoides 3D induzida pelo tratamento de medicamentos anticâncer é um indicador altamente relevante para sua capacidade de inibir a proliferação celular. A eficácia dos medicamentos anticâncer pode ser avaliada de forma quantitativa e eficiente por meio da análise de imagens de campo claro da alteração no tamanho do esferoide usando um microscópio em combinação com o sistema. Neste estudo, as alterações de tamanho dos esferoides HT-29 3D induzidas pelo 5-FU foram avaliadas quantitativamente.

Objectives

Preparação de amostras

Foi semeada uma suspensão de células HT-29 em uma placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) a 750 células/poço para preparar esferoides. O 5-FU foi adicionado aos esferoides 3D quatro dias após o início da cultura de células, e a cultura foi continuada por mais quatro dias. Nas mesmas condições, as monocamadas HT-29 2D foram preparadas em uma microplaca adesiva celular seguida da adição de 5-FU às monocamadas 2D.

Conclusão
Aquisição e análise de imagens de esferoides 3D ou monocamadas 2D compostas por HT-29

Foram obtidas imagens de campo claro de microplacas contendo esferoides HT-29 3D com o sistema (Figura 1). Foram obtidas várias imagens contendo um plano equatorial para um esferoide, seguidas de projeção de intensidade média e análise estatística em cada concentração de 5-FU. A área em corte transversal dos esferoides 3D HT-29 diminuiu com um aumento na concentração de 5-FU, o que indicou que o 5-FU inibe a proliferação celular em esferoides (Figura 2). Para a monocamada 2D HT-29 tingida com Hoechst 33342, a área de adesão foi calculada com base nas imagens fluorescentes obtidas com o sistema. A área de adesão das monocamadas HT-29 2D diminuiu com o aumento da concentração de 5-FU (Figura 2). Esses resultados indicaram que o sistema permite a avaliação da eficácia de medicamentos em esferoides 3D e monocamadas 2D.

Conclusion

PrimeSurface é uma marca registrada da Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus é uma marca registrada e NoviSight e Insightful Analysis, Intelligent Answers são marcas da Olympus Corporation.

Produtos usados nesta aplicação

Software de análise celular 3D

NoviSight

  • Reconhecimento de imagem 3D de toda a estrutura até o subcelular
  • Análise estatística
  • Variedade de ensaios padrão

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