Resposta a medicamentos — Dentro e fora das culturas de células 3D

O efeito de medicamentos em culturas de células 3D foi avaliado por meio de imagens celulares.
Foram investigadas as diferenças no efeito dos medicamentos no exterior e no interior das culturas de células 3D, como esferoides.

Objetivos

Recentemente, foram usadas culturas de células 3D, como esferoides, para estudar a resposta das células aos medicamentos. No entanto, a diferença de resposta no interior e no exterior das culturas de células 3D não foi considerada. Neste estudo, esta diferença foi investigada por meio da observação em profundidade dos esferoides com um microscópio confocal.

Preparação de amostras

Fucci é um indicador de ciclo celular que usa um esquema de cor dupla. Esferoides compostos por células HT-29 transgênicas expressando Fucci foram expostos a 10 nM de cisplatina. Após incubação por 96 horas, o meio contendo cisplatina foi removido das culturas de células, e elas foram fixadas em formalina a 4% e tratadas com reagente de transparência.

Conclusão
Aquisição e análise de imagens fluorescentes

Foram obtidas imagens fluorescentes confocais dos esferoides acima mencionados a cada 5 μm de incremento de espessura, desde a superfície até 150 μm de profundidade. A proporção de luminosidade entre vermelho (fases G0 e G1) e verde (fases S, G2 e M) em cada camada foi analisada com o software de análise. Na ausência da cisplatina, não houve diferença significativa na proporção vermelho/verde entre o exterior e o interior (Figura 1). Na presença de 10 nM de cisplatina, a proporção vermelho/verde aumentou com um aumento na distância da superfície (Figuras 2 e 3).

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