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Notas de aplicação

Avaliação da eficácia de medicamentos — A resposta dos esferoides a um medicamento


A observação confocal combinada com o uso do sistema permite a avaliação da eficácia de medicamentos em esferoides tingidos com um corante fluorescente apropriado.

Objetivos

A maioria dos ensaios sobre a eficácia de medicamentos anticâncer tem se baseado no uso de células imobilizadas cultivadas como monocamadas 2D. No entanto, essas monocamadas 2D são incapazes de recapitular o complexo ambiente nativo das células cancerígenas, como a estrutura 3D. Portanto, as culturas de células 3D como os esferoides estão atraindo a atenção como modelos que têm o potencial de melhorar a relevância fisiológica dos estudos baseados em células. Neste estudo, a eficácia da Estaurosporina (STS) em esferoides foi avaliada por meio da observação confocal combinada com o uso do sistema de análise de imagens celulares.

Objectives

Preparação de amostras

Foi semeada uma suspensão de células HeLa em uma placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) a 500 células/poço. A STS diluída em série foi adicionada a cada poço 48 horas após o início da cultura de células. Foram adicionados Hoechst 33342 (corante de coloração nuclear) e iodeto de propídeo (PI: corante de coloração de células mortas) a cada poço 24 horas após a adição de STS.

Conclusão
Aquisição e análise de imagens fluorescentes

Foram obtidas imagens fluorescentes dos esferoides mencionados acima, tingidos com Hoechst 33342 e PI, usando o sistema. Conforme mostrado na Figura 1, a proporção entre células mortas (pseudovermelho) e todas as células (pseudoazul) aumentou em cada poço, com um aumento na concentração de STS. As proporções podem ser exibidas graficamente em relação à concentração de STS (Figura 2, barras: DP, n=8) usando os resultados da identificação e contagem de núcleos gerados pelo software de análise. Esses resultados indicaram que o sistema permite uma fácil avaliação da eficácia de medicamentos em uma microplaca.

Figure 1: STS concentration-dependent dead cells/all cells images of spheroids*

Figure 1: STS concentration-dependent dead cells/all cells images of spheroids

Figure 2: STS concentration-dependent dead cells/all cells ratio in spheroids

Figure 2: STS concentration-dependent dead cells/all cells ratio in spheroids

PrimeSurface é uma marca registrada da Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus é uma marca registrada e NoviSight e Insightful Analysis, Intelligent Answers são marcas da Olympus Corporation.

Produtos usados nesta aplicação

Software de análise celular 3D

NoviSight

  • Reconhecimento de imagem 3D de toda a estrutura até o subcelular
  • Análise estatística
  • Variedade de ensaios padrão

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