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Notas de aplicação

Avaliação da eficácia de medicamentos — A resposta dos esferoides cocultivados a medicamentos


A observação confocal combinada com o uso do sistema permite a avaliação da eficácia de medicamentos em esferoides cocultivados tingidos com um corante fluorescente apropriado.

Objetivos

A maioria dos ensaios sobre a eficácia de medicamentos anticâncer tem se baseado no uso de células imobilizadas cultivadas como monocamadas 2D. No entanto, essas monocamadas 2D são incapazes de recapitular o complexo ambiente nativo das células cancerosas, como as de uma estrutura 3D. Portanto, culturas de células 3D como esferoides estão chamando a atenção. Além disso, sistemas esferoides cocultivados compostos por dois ou mais tipos de células têm se mostrado úteis no estudo de mecanismos de interação intercelular ou ativação celular. Neste estudo, foi investigado o efeito da cloroquina (CHL) em esferoides cocultivados compostos de U20S e HT-29 por meio da análise de imagens fluorescentes com o sistema.

Objectives

Preparação de amostras

Foi semeada uma suspensão de células HT-29 e U20S transgênicas expressando YFP em uma placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) a 50 células transgênicas U20S/poço e 450 células HT-29/poço. A CHL diluída em série foi adicionada a cada poço 48 horas após o início da cultura de células. Foram adicionados Hoechst 33342 (corante de coloração nuclear) e iodeto de propídeo (PI: corante de coloração de células mortas) a cada poço 48 horas após a adição de CHL. A observação da fluorescência de YFP permite distinguir entre U20S e HT-29.

Conclusão
Aquisição e análise de imagens fluorescentes

Foram obtidas imagens fluorescentes dos esferoides mencionados acima. Conforme mostrado nas figuras, os esferoides cocultivados perderam sua integridade estrutural 3D da estrutura 3D com um aumento na concentração de CHL. Curiosamente, as células HT-29 se dispersaram completamente, enquanto as células U20S (pseudoverdes) permaneceram agregadas. Além disso, a proporção entre células mortas (pseudovermelho) e todas as células (pseudoazul) em cada poço aumentou com um aumento na concentração de CHL. As proporções podem ser exibidas graficamente em relação à concentração de CHL usando os resultados da identificação e contagem de núcleos com o software de análise. Esses resultados indicaram que a eficácia do medicamento é facilmente avaliada usando esferoides cocultivados em uma microplaca.

Conclusion

PrimeSurface é uma marca registrada da Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus é uma marca registrada e NoviSight e Insightful Analysis, Intelligent Answers são marcas da Olympus Corporation.

Produtos usados nesta aplicação

Software de análise celular 3D

NoviSight

  • Reconhecimento de imagem 3D de toda a estrutura até o subcelular
  • Análise estatística
  • Variedade de ensaios padrão

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