Fluorescence Microscopy

Artigos de análise

• Introdução à microscopia de fluorescência

  Aprenda os conceitos básicos da fluorescência, um membro da família de processos de luminescência onipresente, no qual moléculas suscetíveis emitem luz a partir de estados excitados eletronicamente, por meio de um mecanismo físico, mecânico ou químico.

• O microscópio de fluorescência

  Ao contrário de outros modos de microscopia ótica baseada em características macroscópicas de espécimes, como birrefringência, a microscopia de fluorescência é capaz de obter imagens da distribuição de uma única espécie molecular com base apenas nas propriedades de emissão de fluorescência.

• Fontes de luz

  Para gerar intensidade de luz de excitação suficiente para assegurar emissão de fluorescência secundária capaz de detecção, são necessárias fontes de luz poderosas, como lâmpadas LED, de mercúrio e de arco de xenônio (queimador).

• Otimização e solução de problemas

  Esse artigo aborda as principais características da microscopia de fluorescência, como a detecção de objetos fluorescentes que podem ser vagamente visíveis ou muito claros em relação ao fundo, assim como problemas comuns com a configuração do microscópio.

• Detectores de obtenção de imagem

  O debate apresentado destina-se a auxiliar na compreensão de noções básicas da detecção de luz e a fornecer um guia para selecionar um detector adequado para aplicações específicas na microscopia de fluorescência.

• Introdução aos fluoróforos

  A microscopia confocal de varredura a laser e de fluorescência de campo amplo dependem da emissão de fluorescência secundária como um modo de obtenção de imagem, principalmente devido ao elevado grau de sensibilidade conferido pelas técnicas.

• Proteínas fluorescentes com marcador óptico

  Os marcadores ópticos geralmente apresentam pouca ou nenhuma fluorescência inicial sob excitação no comprimento de onda de obtenção de imagem, mas aumentam sua intensidade de fluorescência após ativação por irradiação em um comprimento de onda diferente.

• Erros de microscopia de fluorescência

  Leia mais sobre a forma como a fotomicrografia em condições de iluminação de fluorescência pode apresentar um conjunto único de circunstâncias que podem constituir problemas especiais para o microscopista.

• Aspetos práticos de combinações de filtros de fluorescência

  A maioria dos principais fabricantes disponibiliza um amplo espectro de cubos de filtro, produzindo atualmente conjuntos de filtros capazes de obter imagens da maioria dos fluoróforos comuns em uso hoje em dia.

• Glossário de termos de microscopia confocal e de fluorescência

  O recurso apresentado é fornecido como um guia e ferramenta de referência para visitantes que estão explorando o amplo espectro de tópicos especializados sobre microscopia de fluorescência e microscopia confocal de varredura a laser.

Técnicas avançadas de microscopia de fluorescência

• Introdução à microscopia confocal

  A microscopia confocal permite controlar a profundidade de campo, reduzir ou eliminar informações de fundo do plano de foco e coletar seções ópticas em série de espécimes espessos.

• Microscopia de excitação multifóton

  A microscopia de fluorescência multifóton é uma ferramenta poderosa que combina as técnicas de microscopia de varrimento a laser e excitação de fluorescência multifóton com comprimento de onda longo para capturar imagens 3D e de alta resolução dos espécimes.

• Transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET)

  Ao aplicar a técnica de transferência de energia de ressonância por fluorescência (FRET) à microscopia óptica, é possível determinar a aproximação entre duas moléculas num espaço de vários nanômetros.

• Microscopia de fluorescência por reflexão interna total

  A microscopia de fluorescência por reflexão interna total (TIRFM) é normalmente usada para investigar a interação de moléculas com superfícies, uma área que é de importância fundamental para um amplo espectro de disciplinas em biologia celular e molecular.

• Sistemas laser para microscopia óptica

  Os laseres usados na microscopia óptica são fontes de luz monocromática de alta intensidade que são úteis para muitas técnicas, incluindo retenção óptica, estudos de obtenção de imagens ao longo do tempo de vida e recuperação após fotobranqueamento.

• Microscopia de combinação de fluorescência e DIC

  A microscopia de fluorescência pode ser combinada com técnicas de realce com contraste, como iluminação por contraste de interferência diferencial (DIC), para minimizar os efeitos do fotobranqueamento localizando uma zona de interesse específica em um espécime usando DIC.

• Microscopia de combinação de fluorescência e contraste de fase

  Para minimizar o fotobranqueamento, a microscopia de fluorescência pode ser combinada com iluminação por contraste de fase. A ideia é localizar a zona de interesse específica em um espécime usando a técnica (fase) e, em seguida, sem realocar o espécime, comutar o microscópio para o modo de fluorescência.

• Galeria de imagens digitais de microscopia de fluorescência

  Os espécimes apresentados nesta galeria contêm uma variedade de exemplos de disciplinas usando manchas de fluorocromos específicas e autofluorescência. As imagens foram capturadas com sistemas de câmara digital ou fotomicrografia analógica clássica em película com a película transparente de 35 mm Fujichrome Provia.

Anatomia dos microscópios de fluorescência

• Microscópio vertical da Olympus

  Saiba mais sobre o microscópio de epifluorescência vertical da Olympus equipado com um iluminador vertical que contém uma torre de cubos de filtro e uma fonte de luz de excitação por fluorescência.

• Microscópio invertido da Olympus

  Os microscópios com uma estrutura de estilo invertido (microscópio invertido Olympus IX70) foram projetados para aplicações em culturas de tecidos e são capazes de produzir iluminação de fluorescência através de um caminho episcópico e óptico.

Tutoriais Java interativos

• Caminhos de luz dos microscópios de fluorescência

  Explore os caminhos da luz em um microscópio vertical. O desenho do microscópio apresentado no tutorial ilustra um diagrama de corte do microscópio vertical da Olympus.

• Caminhos de luz dos microscópios invertidos

  Explore os caminhos da luz através de um microscópio invertido de cultura de tecidos equipado tanto com iluminação diacóspica (tungstênio-halogênio) quanto de epifluorescência (arco de mercúrio).

Referências literárias selecionadas

• Referências literárias selecionadas

  O campo da microscopia de fluorescência enfrenta um renascimento com a introdução de novas técnicas, como reflexão confocal, multifotón, deconvolução e interna total, especialmente quando aliadas a avanços nas tecnologias de cromóforos e fluoróforos. Os materiais de referência listados abaixo foram usados na elaboração da seção Fluorescência da Cartilha de microscopia de expressões moleculares.

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