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应用资料

荧光图像分析——微球活/死细胞的测定


可以使用共聚焦显微镜和NoviSight™软件的细胞计数模块定量评估微球内的死细胞比例和药物功效。

目的

从肿瘤表面到核心的距离存在氧气或养分的扩散梯度,这种严酷环境会在肿瘤组织内部深处产生静息细胞或死细胞。微球模型有望模拟肿瘤的微环境。以前,为了观察3D样品的内部必须单独制备每个切片。但是,组织透明化技术的发展现在可以在保留3D样品结构完整性的同时对其内部进行观察。本研究使用NoviSight™软件对用药物处理、固定并制成透明化荧光染色肿瘤微球的共聚焦图像进行3D定量分析。本研究表明,可以使用透明化试剂和NoviSight™软件确认具有药物依赖性的细胞死亡。

目的

样品的制备

将HT-29的细胞悬液以500个细胞/孔的密度种入U底96U孔板(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD)内。在细胞培养开始后8天,将各种浓度的星形孢菌素(STS)和NucView550添加到每个孔内。孵育1天后,将细胞使用4%多聚甲醛固定并用0.5%TritonX-100 / PBS透明化。然后,将细胞核在4°C下用Hoechst 33342隔夜染色,并用ScaleS将微球透明化。

结论
荧光图像的采集和分析

使用FV3000激光扫描共聚焦显微镜可以获得上述微球的共聚焦荧光图像。即使没有STS,微球内部深处的细胞核也会被NucView550(A)染色,表明其发生了细胞凋亡。使用NoviSight™软件进行细胞核识别和细胞计数分析可以定量死细胞比率(B),并且确认STS诱导的细胞死亡以具有剂量依赖性的方式发生(C,D)。这些结果证明NoviSight™软件如何帮助实现药物诱导3D细胞死亡的定量评估。

结论

PrimeSurface为Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.的注册商标。
Olympus为注册商标,NoviSight和Insightful Analysis、Intelligent Answers均为Olympus Corporation的商标。

Products used for this application

3D细胞分析软件

NoviSight

  • 从完整结构到亚细胞级别的3D图像识别
  • 统计分析
  • 多种默认检测方法

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