Life Science Solutions

博客文章

NIR激光器助力复杂多色同步共聚焦成像

作者  -
使用奥林巴斯共聚焦显微镜拍摄的样品图像

激光扫描共聚焦显微镜是一种被广泛使用的生物学研究工具。由于具有良好的色彩分离能力,因此通常被用来对多种荧光探针进行同步成像,当然,生物学家也经常利用其强大的Z轴分辨率对生物样本内部进行深层成像。

现在,激光技术的创新助推共聚焦显微镜在生物学领域的应用,让更复杂的生物学实验成为可能。在本博客文章中,我们将讨论FV3000共聚焦显微镜新型近红外(NIR)激光如何助力复杂多色同步成像的热门实验应用。*

共聚焦显微成像中5+通道多色同步成像的门槛及解决方法

让我们首先介绍一下复杂多色同步成像实验的历史。

多年来,许多研究人员使用DAPI和其他两种颜色(通常为绿色和红色)进行免疫荧光。

随着抗原抗体免疫和成像系统的发展,通过使用更多检测器和更出色的发射光滤波技术,四色免疫荧光成像开始流行。DAPI、绿色、红色和远红色是最常见的四色组合。

然而,在使用第五个通道时,两个关键因素造成了问题。

1.缺乏具有良好光束质量的NIR激光二极管。

首先,具有良好光束质量的NIR激光二极管尚未在共聚焦扫描显微镜中普及。共聚焦成像所用激光二极管需要具备足够大的功率(但不要太大)、极小的功率波动以及可兼容的光束轮廓三个必需特征。但是,直到最近几年,在近红外波长范围才有少数NIR激光二极管可供选用。

但最新的激光二极管技术让这种情况发生改观。我们的FV3000共聚焦显微镜现在提供可有效激发第二种染料的730 nm和785 nm激光二极管,这些染料例如:

  • Cyanine7 (Cy7)
  • Alexa Fluor 750
  • Alexa Fluor 790
  • DyLight 800
  • IRDye 800
  • Indocyanine green(ICG)

这些染料以及越来越多的新荧光探针让添加第五和第六通道进行多色同步成像更具吸引力。

2.光电倍增管检测器在NIR波长上的检测灵敏度降低。

第二个问题是,很多光电倍增管(PMT)对于730 nm和785 nm激发的荧光波长的检测灵敏度降低。

对于常用的磷砷化镓光电倍增管(GaAsP PMT)而言(其对可见光谱中间部位的波长具有更高灵敏度),对于近红外光检测范围灵敏度的降低特别突出。在750+ nm范围内,GaAsP PMT检测器的灵敏度非常低。

为了克服这一难题,我们将红移GaAs检测器集成到FV3000共聚焦激光显微镜中。

现在,我们的FV3000系统可提供包括多碱(标配)光电倍增管和GaAsP PMT(高灵敏度)在内多种不同组合的GaAs检测器。这些配置可以将GaAs检测器作为复杂应用实验的第五或第六通道使用* 。(*特殊应用)

结合我们的X Line高性能物镜,FV3000系统就可以实现从400–1000 nm的高质量宽色差校正。这样就可以在明场和多色荧光成像过程中获得更好的色彩还原。

*此为定制解决方案,某些地区可能无法提供。有关详情请联系您当地奥林巴斯销售代表。

相关内容

手册FV3000激光共聚焦扫描显微镜

视频:FV3000共聚焦显微镜产品介绍

资源中心 量身定制的成像解决方案

生命科学应用部门经理

James Lopez于2010年获得芝加哥大学生物医学专业的博士学位。James在钙成像、FRET、活细胞成像和活体成像方面拥有近十年的经验,在加入奥林巴斯后担任共聚焦和多光子销售代表。随后,他转入为共聚焦和多光子系统提供支持的奥林巴斯生命科学应用部门。目前,他负责管理美国、加拿大和拉丁美洲市场的生命科学应用部门。

2020年1月21日
Sorry, this page is not available in your country
InSight Blog Sign-up
You will be unable to submit the form unless you turn your javascript on.

By clicking subscribe you are agreeing to our privacy policy which can be found here.

对不起,此内容在您的国家不适用。