使用细胞周期标志物Fucci观察干细胞的生理状态

球囊细胞群包括CD-133阳性人体胃癌细胞,它们标记有细胞周期标志物Fucci,在长时间内进行培养和连续观察。 载玻片的上层隔间内,用无血清的培养基培养球囊细胞,球囊细胞保持在干细胞的状态,导致细胞周期中止。 另一方面,载玻片的下层隔间内,使用血清培养球囊细胞,细胞进行分裂,血清是维持细胞分裂状态的关键因素。 这些图像显示这些球囊细胞转入单层培养状态(不再保持干细胞状态)。 激光扫描共聚焦显微镜FV10i能够对厚的球囊细胞进行三维观察。
*使用激光扫描共聚焦显微镜FV10i连续48个小时拍摄了这些图像。

图像数据提供方:
Shuya Yano, Toshiyoshi Fujiwara
胃肠病学手术移植科和肿瘤外科,冈山大学医学、牙医和制药学研究生院,
参考资料:
Yano S, Tazawa H, Hashimoto Y, Shirakawa Y, Kuroda S, Nishizaki M, Kishimoto H, Uno F, Nagasaka T, Urata Y, Kagawa S, Hoffman RM, Fujiwara T. 基因工程处理过的溶瘤腺病毒将静止期的癌干样细胞诱导并且将它们致命地困入S/G2/M-期。 Clin Cancer Res.。 December 1, 2013 19:6495-6505.
 

通过Telomelysin(OBP-301)激活并破坏睡眠期癌症的干细胞

采用telomelysin(OBP-301)、顺铂或射线处理标记有细胞周期标志物Fucci的CD133阳性干样人体胃癌细胞(作为球囊细胞进行培养)。 使用顺铂或射线处理癌细胞丛后,它们保持着相同的尺寸,并且大多数细胞的细胞周期没有超过G1阶段(以红色显示)。 另一方面,采用telomelysin处理的癌细胞丛显示出从红色到黄色和绿色的颜色变化,以及其尺寸的逐渐减小。 这种情况显示,telomelysin抑制了p53和p21的表达,这些都会停止干样细胞的细胞周期。 Telomelysin也增加了E2F-1的表达,这相反导致了细胞周期的激活。
*使用激光扫描共聚焦显微镜FV10i连续8天拍摄了这些图像。

图像数据提供方:
Shuya Yano, Toshiyoshi Fujiwara
胃肠病学手术移植科和肿瘤外科,冈山大学医学、牙医和制药学研究生院
参考资料:
Yano S, Tazawa H, Hashimoto Y, Shirakawa Y, Kuroda S, Nishizaki M, Kishimoto H, Uno F, Nagasaka T, Urata Y, Kagawa S, Hoffman RM, Fujiwara T. 基因工程处理过的溶瘤腺病毒将静止期的癌干样细胞诱导并且将它们致命地困入S/G2/M-期。 Clin Cancer Res. December 1, 2013 19:6495-6505.
 

Fucci诱导的HT29细胞系的球囊化

图像数据提供方:
Dr. Yuji Mishima, Dr. Kiyohiko Hatake
临床化疗科,癌症化疗中心,日本癌症研究基金会
 

多层成肌细胞层中成纤维细胞的迁移行为和细胞-细胞连接

图像数据提供方:
Eiji Nagamori, Ph.D Masahiro Kino-oka, Ph.D.
生物技术系,工程研究生院,大阪大学

使用YFP作为显示剂观察斑马鱼胚胎中的维甲酸信号

图像数据提供方:
Satoshi Shimozono, Ph.D. Atsushi Miyawaki, M.D., Ph.D.
细胞功能动力学实验室,高级技术开发核心,RIKEN脑科学研究所
参考资料:
Shimozono S. et al. Visualization of an endogenous retinoic acid gradient across embryonic development. Nature 496, 363-366 (18 April 2013)
 

抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC) 的观察

使用抗体药物西妥昔单抗处理了RPMI 4788细胞(人体结肠癌细胞系),并与自然杀伤细胞ADCC(NK)一起培养,在添加NK细胞后使用FV10i进行观察。
西妥昔单抗:Alexa Fluor 647(红色)
NK细胞:ZsGreen(绿色)
检测死亡细胞:DAPI(蓝色)

图像数据提供方:
Dr. Yuji Mishima, Dr. Kiyohiko Hatake
临床化疗科,癌症化疗中心,日本癌症研究基金会
 

观察不同浓度抗癌顺铂的效果

观察经过抗癌药物顺铂处理后的HT-29细胞的细胞周期,对表达Fucci(荧光细胞周期指示剂)的HT-29进行时间序列成像。 48小时的培养后,在35 mm的玻底培养皿中以不同浓度的顺铂(对照组(0 ug/ml)、低浓度组(0.25 ug/ml)、高浓度组(2.5 ut/ml))处理这些细胞。

图像数据提供方:
Dr. Yuji Mishima, Dr. Kiyohiko Hatake
临床化疗科,癌症化疗中心,日本癌症研究基金会
 

具有长投射的细胞-细胞融合过程中磷酸肌醇的定位

表达显示剂的RAW264.7细胞的构建是在1 µg/ml强力霉素的作用下用10 ng/ml的RANKL刺激48h。 以红色显示ptdIns(4,5)P2的定位,以绿色显示PtdIns(3,4,5)P3的定位。 34分钟内每隔2分钟拍摄一张图像。标尺,25 µm。

图像数据提供方:
Tsukasa Oikawa, Ph.D.
分子生物学系,北海道大学医学研究生院
参考资料:
Oikawa T, et al. Tks5依赖的外周伪足状结构的形成介导细胞-细胞的融合。 J Cell Biol. 197(4):553-568(2012年)。

Hela细胞*1

染料: YFP (肌动蛋白)
物镜:60XW NA1.2
激光波长:473 nm
时间间隔:每隔3.5分钟(总计12个小时)

小鼠大脑

采用DAPI(细胞核 – 蓝色)、Alexa 488(肌动蛋白 – 绿色)、Alexa 568(神经纤维 – 红色)荧光标记的小鼠大脑。 图像由9 个不同的感兴趣区域组成,以1024×1024的分辨率在Z轴上自动采集14层图像,然后使用FV10i软件拼接在一起。

Hela细胞*1

时间间隔:晚上每隔20分钟
绿色:GFP
红色:Mito Tracker Red

*1 虽然它已经成为医学研究中最重要的细胞系之一,但我们必须认识到Henrietta Lacks对科学的贡献是在未经她同意的情况下发生的。这一不公正现象在导致免疫学、传染病和癌症方面重大发现的同时,也引发了关于医学中的隐私、伦理和同意方面的重要对话。
要了解更多关于Henrietta Lacks的生平和她对现代医学的贡献,请点击这里。
http://henriettalacksfoundation.org/