Microscopía de fluorescencia
Presentación global de la sección:
La microscopía de fluorescencia, es decir el uso de la iluminación y observación de fluorescencia a través de sistemas microscópicos, es la técnica de microscopía con mayor uso en la actualidad, tanto en las ciencias médicas como en las biológicas. El predominio de la microscopía de fluorescencia ha impulsado el desarrollo de microscopios más sofisticados, como también numerosos accesorios de fluorescencia. La epifluorescencia, o fluorescencia de luz incidente, se ha convertido en el método de elección para muchas aplicaciones e interviene en gran parte de este tutorial. La sección sobre la microscopía de fluorescencia del manual básico ha sido dividida en varias categorías para que sea más fácil de organizar y descargar. Use los enlaces a continuación a fin de navegar a través de los temas de interés asociados a la microscopía de fluorescencia.
Consulta de artículos
Introducción a la microscopía de fluorescencia
Adquiera los conceptos básicos sobre la fluorescencia: un miembro ubicuo de la familia de los procesos de luminiscencia en los que las moléculas susceptibles emiten luz a partir de estados de excitación, generados de forma electrónica por un mecanismo físico, mecánico o químico.
Microscopio de fluorescencia
A diferencia de otros modos de microscopía óptica, basados en características de muestras macroscópicas, como la birrefringencia, la microscopía de fluorescencia es capaz de procesar en imagen la distribución de una única especie molecular únicamente en función de las propiedades de emisión de la fluorescencia.
Fuentes de luz
Con el objetivo de generar suficiente intensidad de luz de excitación para proporcionar una emisión de fluorescencia secundaria apta a la detección, se requieren potentes fuentes de luz, tales como las LED, las de mercurio y las lámparas de arco [quemador] de xenón.
Optimización y resolución de problemas
En este artículo se repasan las características clave de la microscopía de fluorescencia, como la detección de objetos fluorescentes, cuya visibilidad puede ser débil o más brillante en función del fondo, así como los problemas comunes que se presentan en la configuración del microscopio.
Detectores dedicados al procesamiento de imágenes
La discusión expuesta tiene como objetivo ayudar a comprender los conceptos básicos de la detección de luz y proporcionar una guía para seleccionar un detector adecuado según la aplicación específica asociadas a la microscopía de fluorescencia.
Introducción a los fluorocromos
La microscopía de escaneo láser confocal y de fluorescencia de campo amplio usa la emisión de fluorescencia secundaria como modo para el procesamiento de imágenes; esto se debe eminentemente al alto grado de sensibilidad que ofrecen las dos técnicas.
Proteínas fluorescentes de marcador óptico
Los marcadores ópticos bajo excitación, por lo general, muestran poca o ninguna fluorescencia inicial mediante la longitud de onda del procesamiento de imágenes; sin embargo, aumentan su intensidad de fluorescencia tras la activación por irradiación a partir de una longitud de onda diferente.
Errores en la microscopía de fluorescencia
Descubra más sobre cómo la fotomicrografía, bajo condiciones de iluminación de fluorescencia, puede generar un conjunto particular de circunstancias que plantearían problemas sustanciales al microscopista.
Aspectos prácticos extraídos de la combinación de filtros de fluorescencia
Existe una amplia variedad de cubos de filtros disponibles a partir de los principales fabricantes, quienes ahora producen conjuntos de filtros capaces de procesar en imagen los más comunes fluorocromos en uso actualmente.
Glosario de términos de la microscopía de fluorescencia y confocal
El recurso presentado sirve como guía y herramienta de referencia para los lectores que exploran la amplia variedad de temas especializados en microscopía de fluorescencia y escaneo láser confocal.
Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia
Introducción a la microscopía confocal
La microscopía confocal ofrece la capacidad de controlar la profundidad de campo, eliminar o reducir la información de fondo fuera del plano focal, y recolectar secciones ópticas en serie de muestras gruesas.
Microscopía de excitación multifotónica
La microscopía de fluorescencia multifotónica es una herramienta poderosa que combina las técnicas de microscopía de escaneo láser con la excitación de la fluorescencia multifotónica de amplia longitud de onda a fin de capturar imágenes de alta resolución y 3D a partir de las muestras.
Transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET)
Al aplicar la técnica de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) en la microscopía óptica, es posible determinar la distancia entre dos moléculas en varios nanómetros.
Microscopía de fluorescencia de reflexión total interna
La microscopía de fluorescencia de reflexión total interna (TIRFM) se usa comúnmente para investigar la interacción de moléculas con superficies: un área de fundamental importancia en una serie de disciplinas de biología celular y molecular.
Sistemas láser en la microscopía óptica
Los láseres que se emplean en la microscopía óptica son fuentes de luz monocromática de alta intensidad, útiles para muchas técnicas, como el confinamiento óptico, los estudios de procesamiento de imágenes de seres vivos y la recuperación tras el fotoblanqueo.
Microscopía por combinación de fluorescencia y DIC
La microscopía de fluorescencia puede combinarse con técnicas de optimización de contraste, como la iluminación de contraste de interferencia diferencial (DIC), a fin de minimizar los efectos del fotoblanqueo cuando se define un área específica en una muestra bajo DIC.
Microscopía por combinación de fluorescencia y contraste de fase
Con el propósito de minimizar el fotoblanqueo, la microscopía de fluorescencia puede combinarse con la iluminación de contraste de fase. El concepto es ubicar el área de interés en una muestra usando la técnica (de fase) y, a continuación, sin reubicar la muestra, cambiar el microscopio al modo de fluorescencia.
Galería de imágenes digitales a través de la microscopía de fluorescencia
Las muestras que aparecen en esta galería contienen una variedad de ejemplos procedentes de distintas disciplinas que hacen uso de tinciones específicas de fluorocromos y autofluorescencia. Las imágenes fueron capturadas con sistemas de cámaras digitales o por la fotomicrografía clásica sobre película, usando películas transparentes Fujichrome Provia de 35 milímetros.
Anatomía del microscopio de fluorescencia
Microscopios verticales de Olympus
Obtenga información sobre el microscopio vertical de epifluorescencia de Olympus, cuyo iluminador vertical presenta una torreta de cubos de filtro y una fuente de luz de excitación de fluorescencia.
Microscopios invertidos de Olympus
Los microscopios con estativos de estilo invertido (p. ej., microscopio invertido IX70 de Olympus) están diseñados para aplicaciones de cultivo tisular, y son capaces de producir iluminación de fluorescencia a través de una vía episcópica y óptica.
Tutoriales interactivos en Java
Vías de iluminación del microscopio de fluorescencia
Explore las vías de iluminación de un microscopio vertical. La imagen del microscopio presentado en el tutorial ilustra un diagrama recortado del microscopio vertical de Olympus.
Vías de iluminación del microscopio invertido
Explore las vías de iluminación a través de un microscopio invertido dedicado a cultivos tisulares y equipado con iluminación diascópica (tungsteno-halógeno) y epifluorescencia (arco de mercurio).
Referencias de literatura seleccionada
Referencias de literatura seleccionada
El campo de la microscopía de fluorescencia experimenta un renacimiento a través de la introducción de nuevas técnicas, como la confocal, multifotónica, deconvolución y la reflexión interna total, en especial, al combinarlas con los avances tecnológicos a nivel de los cromóforos y fluorocromos. Los materiales de referencia, que se listan a continuación, fueron usados para elaborar la sección Fluorescencia a partir del Manual básico sobre la microscopía de expresiones moleculares.
Productos relacionados con Olympus:
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