Monitoramento remoto de cultura primária de células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea

Delineamento experimental

As células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea são multipotentes. Portanto, elas são alvo de pesquisa ativa e aplicações clínicas como a fonte de células para medicina regenerativa. Ao semear fluidos ou células de medula óssea em placas de Petri, as células-tronco mesenquimais se proliferam como células aderentes. Como resultado, é possível separar as células-tronco mesenquimais das células sanguíneas que estão flutuando. Neste artigo, relatamos os resultados do monitoramento remoto de cultura primária de células-tronco mesenquimais usando o sistema de monitoramento de incubação Olympus Provi™ CM20.

Procedimentos experimentais

A equipe adquiriu células de medula óssea humana comercialmente disponíveis e as semeou em uma placa de 24 poços (Sumitomo Bakelite, N.º de cat. MS-80240) a uma densidade de 950.000 células/0,5 mL/poço usando meio Dulbecco modificado por Iscove (Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium, IMDM) suplementado com soro fetal bovino (SFB) a 10% e solução de penicilina/estreptomicina a 1%. As imagens das células foram obtidas a cada 1 hora usando o sistema CM20 com foco automático. Como observou-se a proliferação de células aderentes no dia 4 da cultura, as células foram monitoradas por até 6 dias após a troca do meio.

Resultados

Figura 1. Cultura primária de células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea. As setas indicam células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea.

A maioria das células eram células sanguíneas e não se observou células-tronco mesenquimais imediatamente após a semeadura. No entanto, no dia 4 após a semeadura, observou-se o surgimento de células-tronco mesenquimais com uma morfologia de corpúsculo. Em seguida, o meio foi substituído para remover as células sanguíneas. No dia 6 após a semeadura, observou-se a proliferação de um grande número de células-tronco mesenquimais.

Benefícios do uso de avaliações com sistema de monitoramento de incubação

Até o aparecimento de células aderentes, a cultura primária de células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea deve ser feita do modo mais delicado possível. É necessário evitar ao máximo qualquer agitação da placa, e isso pode acontecer durante a observação microscópica ou troca do meio. Neste artigo, demonstramos que o sistema CM20 possibilitou o monitoramento remoto das células incubadas. Usando o sistema CM20, reduzimos o tempo de operação e conseguimos processar o restante do experimento no tempo adequado.

Agradecimentos

Esta nota de aplicação foi preparada com a ajuda do seguinte pesquisador:

Takahiro Yamaguchi, PhD, Pesquisador Principal da ACEL, Inc.