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Nota de aplicación

Recuento celular: Medición del número de células en esferoides


La observación confocal combinada con el sistema de análisis de imágenes celulares permite a los usuarios contar el número de células en los esferoidesusando imágenes de secciones transversales de esferoides.

Objetivos

Conocer el número de células es uno de los parámetros más importantes para los ensayos en los que se usan células, y también durante el análisis de los esferoides. El recuento celular con un hemocitómetro requiere una suspensión celular que se prepara usando una disolución de esferoides con tripsina. No obstante, al seguir esta preparación, las características de los esferoides, que se originan en las estructuras 3D de las células, se pierden. En este estudio, se hizo un recuento celular no destructivo de los esferoides de la siguiente forma: la cantidad de células en las imágenes de secciones transversales de esferoides fue medida usando la observación confocal combinada con el sistema de análisis celular. Los resultados fueron comparados con los obtenidos usando un hemocitómetro.

Objectives

Preparación de muestras

Se cultivó una suspensión celular de HeLa, o HT-29, en la placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) con una proporción de 500 células/pocillo. Cada esferoide fue cultivado durante 48 horas después del inicio del cultivo celular. Las mitades de cada esferoide se fijaron en una solución de formalina al 4 % seguida de una tinción con Hoechst 33342 que se dejó actuar durante la noche para adquirir el tono transparente. Las mitades restantes de todos los esferoides fueron tratadas con tripsina, que se dejó actuar durante la noche para preparar la suspensión celular.

1) Susaki et.al. Cell. 2014 Apr 24;157(3):726-39. doi: 10.1016/j.cell.2014.03.042. Epub 2014 Apr 17.

Conclusión
Recuento celular con el sistema de análisis celular y el hemocitómetro

Las imágenes fluorescentes de los esferoides mencionados anteriormente se obtuvieron mediante el uso del sistema. Excitación: 405 nm; Emisión: 488 nm. Para contar las células, el sistema adquiere imágenes de secciones transversales de esferoides cada 20 μm y después identifica y cuenta las células visibles (Figura 1). A continuación, se suma el número de núcleos para estimar el número total de células dentro de todo el esferoide (recuento del sistema). Los resultados se comparan con los obtenidos usando un hemocitómetro (recuento manual), como se muestra en la Figura 2 (barras: SD, n=6). Estos resultados demostraron que el sistema permite contar las células de los esferoides y mantiene su integridad estructural, sin tener que disolver los esferoides usando tripsina.

Conclusion

PrimeSurface es una marca registrada de Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus es una marca registrada, y NoviSight and Insightful Analysis, Intelligent Answers son marcas comerciales de Olympus Corporation.

Productos usados para esta aplicación

Software de análisis celular 3D

NoviSight

  • Reconocimiento de imagen 3D de la estructura global al nivel subcelular
  • Análisis estadístico
  • Diversos ensayos predeterminados

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