Vue d’ensemble

	Un pas de géant dans l’imagerie de cellules vivantes Le LV200 a été élaboré avec soin pour l’imagerie longue durée de la bioluminescence intracellulaire. La conception optique entièrement revisitée améliore radicalement la sensibilité et permet l’étude détaillée des cellules photosensibles et des sondes luminescentes avec un grossissement important. Le système intégré de contrôle de la température, de l’humidité et du flux de gaz permet de maintenir les cultures cellulaires ou les coupes de tissus dans un environnement sain tout au long de la période d’observation, et le boîtier unique étanche à l’air du LV200 protège l’échantillon et les optiques de la lumière extérieure. Contactez-nous

Un pas de géant dans l’imagerie de cellules vivantes

Le LV200 a été élaboré avec soin pour l’imagerie longue durée de la bioluminescence intracellulaire. La conception optique entièrement revisitée améliore radicalement la sensibilité et permet l’étude détaillée des cellules photosensibles et des sondes luminescentes avec un grossissement important. Le système intégré de contrôle de la température, de l’humidité et du flux de gaz permet de maintenir les cultures cellulaires ou les coupes de tissus dans un environnement sain tout au long de la période d’observation, et le boîtier unique étanche à l’air du LV200 protège l’échantillon et les optiques de la lumière extérieure.

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Une imagerie non nocive pour les cellules

Comme la luminescence ne requiert pas de lumière d’excitation, elle est non toxique pour les cellules. Il n’y a en outre aucun bruit de fond ni aucune autofluorescence susceptible de poser problème. La luminescence est par conséquent la lumière idéale pour l’imagerie de cellules vivantes.

Microscopie de bioluminescence avancée

La luminescence présente plusieurs avantages potentiels par rapport à la fluorescence, notamment l’absence de phototoxicité et de photoblanchiment et de meilleurs rapports signal sur bruit en raison de l’absence de bruit de fond, ce qui en fait la solution idéale pour un suivi quantitatif à long terme des changements dans les systèmes de cellules vivantes. L’observation de la luminescence était auparavant freinée par un certain nombre de difficultés techniques. Avec le LUMINOVIEW LV200, Olympus a su développer un système de microscopie de luminescence qui surmonte ces difficultés et met à profit pour la première fois les capacités de l’imagerie de bioluminescence dans un système commercial.

Dépasser les limites de la fluorescence

La microscopie en fluorescence et les techniques associées présentent de nombreux avantages, mais également plusieurs limites. L’imagerie de bioluminescence peut permettre de dépasser ces limites. La conception optique unique du nouveau Olympus LV200 réunit les avantages de la fluorescence et de la bioluminescence pour créer un système capable de produire des images lumineuses à haute résolution.

Dépasser les limites de la fluorescence

Fluorescence

De manière générale, les émissions fluorescentes sont de courte durée et très intenses et nécessitent d’utiliser certaines fréquences lumineuses pour la lumière d’excitation. La lumière d’excitation étant requise au moment de l’imagerie, le système optique doit être capable d’émettre une lumière forte et pleinement contrôlable à une certaine longueur d’onde et de projeter la lumière émise à une longueur d’onde différente vers les yeux de l’observateur et/ou la caméra. Malgré ces exigences optiques relativement complexes, les techniques de fluorescence se sont développées et permettent des avancées considérables dans de nombreux domaines de recherche.

Imagerie de bioluminescence

De manière générale, les émissions de luminescence ont des durées de vies variables et sont souvent de faible intensité, mais en raison de l’absence de bruit de fond ou d’autofluorescence, elles peuvent être mesurées avec un fort rapport signal/bruit. Cela fait de la luminescence la solution idéale pour les applications sur des échantillons avec une forte autofluorescence, comme l’imagerie d’un animal entier ou d’échantillons contenant différents composés provenant de chimiothèques. Les systèmes d’imagerie in vivo et les luminomètres pour microplaques ont connu un grand succès dans ces domaines.

Un rapport signal sur bruit élevé sans photoblanchiment ni phototoxicité

L’imagerie de bioluminescence présente d’importants avantages sur l’imagerie en fluorescence car elle combine un rapport signal sur bruit élevé et l’absence d’effets photoblanchissant et phototoxique. Qui plus est, seules les cellules viables émettent des signaux de luminescence, car l’émission n’est possible qu’avec un métabolisme fonctionnel. En conséquence, les mesures de bioluminescence sont idéales pour les cellules vivantes sensibles et sont absolues et directement quantitatives. Ces avantages ne se limitent plus désormais à l’imagerie macro et aux mesures sur des populations de cellules, mais peuvent également être appliqués à la microscopie haute résolution.

Des images de haute qualité

Olympus a mis au point le système d’imagerie de bioluminescence LV200, qui produit des images incroyablement détaillées en utilisant des CCD standard plutôt que des détecteurs de photons spécialisés. Pour ce faire, la conception optique du système est hautement spécialisée de sorte à maximiser la captation de la lumière, un point essentiel compte tenu du faible niveau de luminosité émis.

Un trajet optique optimisé

Le trajet optique de l’objet à la caméra est rectiligne et le plus court possible pour garantir que le plus de lumière possible atteigne le capteur CCD. Il n’y a plus besoin de miroirs, de filtres ou de lentilles supplémentaires qui absorberaient de la lumière et réduiraient encore le signal. En outre, le tube optique a été conçu avec une très grande ouverture numérique, ce qui permet une sensibilité bien supérieure aux optiques des microscopes conventionnels. Résultat : le LV200 produit des signaux de sortie bien plus intenses que les systèmes traditionnels et peut donc être utilisé avec des caméras à CCD ou EM-CCD conventionnel. Le LV200 peut utiliser différents grossissements, de 0,8x à 20x, ce qui lui permet de prendre des images parfaitement nettes des échantillons, des grandes coupes de cerveau aux cellules isolées.

	Une imagerie d’une résolution supérieure Ces propriétés optiques uniques garantissent une résolution impressionnante au niveau cellulaire jusqu’à présent impossible avec l’imagerie de luminescence. Ces améliorations ajoutées au nombre de sondes luminescentes désormais disponibles promettent de faire passer l’imagerie = microscopique à la vitesse supérieure. Ces propriétés permettent également de profiter d’une excellente résolution spatiale, de sorte que les signaux faibles à proximité de zones avec des signaux forts puissent être distingués très facilement, ce qui est impossible sur un luminomètre.

Une imagerie d’une résolution supérieure

Ces propriétés optiques uniques garantissent une résolution impressionnante au niveau cellulaire jusqu’à présent impossible avec l’imagerie de luminescence. Ces améliorations ajoutées au nombre de sondes luminescentes désormais disponibles promettent de faire passer l’imagerie = microscopique à la vitesse supérieure. Ces propriétés permettent également de profiter d’une excellente résolution spatiale, de sorte que les signaux faibles à proximité de zones avec des signaux forts puissent être distingués très facilement, ce qui est impossible sur un luminomètre.

Utilisation dans un environnement de laboratoire

Le boîtier opaque du LV200 protège les échantillons et les optiques de la lumière externe et permet d’utiliser le microscope à la lumière ambiante dans le laboratoire. Pour les applications ou les échantillons qui nécessitent de longues durées d’exposition, il peut être préférable de placer le microscope dans une pièce peu lumineuse.

Développement des capacités d’imagerie actuelles

Avec des composants optiques optimisés pour la détection de lumière luminescence, le LV200 est en outre conçu pour satisfaire aux exigences d’une grande variété de travaux de recherche. Il dispose de roues porte-filtres d’excitation et d’émission pour permettre l’imagerie de luminescence bicolore et l’imagerie de fluorescence en lumière transmise. Avec l’éclairage en fond clair standard et les anneaux de contraste de phase, il est possible de repérer facilement les zones cibles de l’échantillon avant de basculer en détection de luminescence. Il est donc possible de produire des superpositions luminescentes et fluorescentes sur les images en fond clair, ce qui rend enfin possible la localisation des objets et la colocalisation de signaux lumineux.

Développement des capacités d’imagerie actuelles

	Incubation des échantillons pendant l’imagerie Avec un système désormais capable de produire une imagerie à long terme, il est important de pouvoir laisser les échantillons sur la platine pour toute la durée de l’expérience d’imagerie. Le LV200 est conçu de sorte que les échantillons puissent être placés à l’intérieur d’un caisson permettant un contrôle très précis de l’environnement avec une température indépendante pour la platine, la chambre d’incubation, le couvercle supérieur et l’objectif. En outre, un réservoir d’eau est utilisé pour maintenir le bon taux d’humidité tandis que le contrôle du débit de C02 maintient un pH stable. Un tel contrôle environnemental permet de suivre des échantillons de façon continue sur plusieurs jours ou même plusieurs semaines sans qu’il soit nécessaire de les déplacer entre le microscope et l’incubateur.

Incubation des échantillons pendant l’imagerie

Avec un système désormais capable de produire une imagerie à long terme, il est important de pouvoir laisser les échantillons sur la platine pour toute la durée de l’expérience d’imagerie. Le LV200 est conçu de sorte que les échantillons puissent être placés à l’intérieur d’un caisson permettant un contrôle très précis de l’environnement avec une température indépendante pour la platine, la chambre d’incubation, le couvercle supérieur et l’objectif. En outre, un réservoir d’eau est utilisé pour maintenir le bon taux d’humidité tandis que le contrôle du débit de C02 maintient un pH stable. Un tel contrôle environnemental permet de suivre des échantillons de façon continue sur plusieurs jours ou même plusieurs semaines sans qu’il soit nécessaire de les déplacer entre le microscope et l’incubateur.

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Caractéristiques techniques

Méthodes d’observation	Imagerie de luminescence, fond clair en lumière transmise, fluorescence transmise de base
Corps principal du LV200	Boîtier opaque
	Mise au point manuelle
	Platine XY coaxiale
	Roue porte-filtres d’excitation motorisée avec 3 positions pour filtres optiques 25 mm standard
	Roue porte-filtres d’émission motorisée avec 6 positions pour filtres optiques 25 mm standard
	Condenseur pour fond clair en lumière transmise couplé au guide-lumière
	Monture C pour caméra
	Tube optique optimisé pour l’imagerie de luminescence, grossissement 0,2 X
Dispositif d’éclairage	Boîtier de lampe halogène externe couplé à un guide-lumière
Contrôleur	Contrôleur IX-UCB pour roue à filtres et éclairage
Interrupteur manuel	Interrupteur manuel pour roue à filtres et éclairage
Contrôle de l’environnement	Incubateur de type chambre double, couche pour boîte de 35 mm avec contrôleur, élément chauffant de platine, élément chauffant du couvercle supérieur,
Contrôle de l’environnement	élément chauffant du corps principal, élément chauffant de l’objectif, débitmètre pour 5 % de CO2 et 95 % d’air
Table du système	Env. 600 (L) x 600 (P) x 700 (H) mm (nécessaire si une caméra de grande taille est utilisée)
Options de caméra	En fonction de l’application et de la sensibilité requise, caméras à CCD refroidi, caméras à EM-CCD ou capteur balayages lent fortement refroidi
Options de caméra	Il est possible d’utiliser des caméras à CCD. (Veuillez vous informer quant à la compatibilité caméra/logiciel.)
Consommation électrique	Unité principale 850 VA
Consommation électrique	Contrôleur 840 VA
Encombrement	Env. 1500 (L) x 750 (P) mm (suivant la configuration)
Poids total	Env. 70 kg (suivant la configuration)

Objectifs recommandés

	S. O.	Distance frontale (mm)	Correction (mm)
UPLSAPO 10X	0,4	3,1	0,17
UPLSAPO 20X	0,75	0,6	0,17
UPLSAPO 40X	0,9	0,18	0.11 - 0.23
UPLSAPO 60XO	1,35	0,15	0,17
UPLSAPO 100XOI	1,4	0,13	0,17
LUCPFLN 20X	0,45	6.6 - 7.8	0 – 2
LUCPFLN 40X	0,6	2.7 - 4	0 – 2
PLAPON 60XO	1,42	0,15	0,17