Réponse à un traitement médicamenteux : analyse du cycle cellulaire de cultures cellulaires 3D

L’effet des médicaments anticancéreux sur les cultures cellulaires 3D peut être évalué à l’aide de l’imagerie cellulaire 
et de l’indicateur de cycle cellulaire FUCCI (Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator).

Objectifs

Dans une étude récente, des cultures cellulaires 3D ont été utilisées en complément de cultures cellulaires 2D conventionnelles pour explorer les mécanismes d’action de médicaments anticancéreux. Au cours de cette étude, la réponse de cultures cellulaires 3D aux médicaments a été analysée tant du point de vue du cycle cellulaire que de la mort cellulaire.

Préparation des échantillons

L’indicateur FUCCI est un indicateur de cycle cellulaire comprenant deux rapporteurs fluorescents de deux couleurs différentes. Du milieu de culture a été ensemencé par une suspension de cellules HT-29 transgéniques exprimant l’indicateur FUCCI dans une microplaque de 96 puits à fond en U. De la cisplatine diluée en série (0 à 10 nM) a été ajoutée aux cultures cellulaires 72 heures après la mise en culture. Après une incubation de 96 heures, le milieu contenant la cisplatine a été éliminé et les cellules ont été fixées au formol à 4 %.

Conclusion
Acquisition et analyse d’images en fluorescence

Des images des cultures cellulaires 3D ont été acquises à deux longueurs d’ondes (488 et 561 nm) à l’aide d’un microscope confocal à fluorescence et du système d’analyse d’imagerie cellulaire. Les données de luminosité de la fluorescence ont été traitées par projection d’intensité maximale. Cette étape a été suivie par l’identification des noyaux grâce au logiciel d’analyse et par la numération des cellules. Le nombre de cellules HT-29 présentes dans les sphéroïdes 96 heures après l’ajout de cisplatine est indiqué dans la figure 1. L’analyse des signaux bicolores du système FUCCI indique que le traitement des cultures cellulaires 3D par la cisplatine a induit une réduction des phases G0 et G1 du cycle cellulaire et une réduction du nombre de cellules (figures 2 et 3). 

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