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对药物处理的反应 - 3D细胞培养的细胞周期分析


抗癌药对3D细胞培养的影响可以通过细胞成像进行评估。
与细胞周期指示剂Fucci结合使用,就可以研究抗癌药对细胞周期的影响。

目的

除常规的2D细胞培养外,3D细胞培养近期还被用于抗癌药物的机理研究。本研究从细胞周期以及细胞死亡的角度分析3D培养细胞对药物的反应。

目的

样品的制备

Fucci是一种采用双色方案的细胞周期指示剂。将表达Fucci的转基因HT-29细胞的细胞悬液种入U型底96孔板中。细胞培养开始后72小时,将细胞培养物暴露于连续稀释的顺铂(0-10 nM)中。孵育96小时后,从细胞培养物中除去含有顺铂的培养基,并将其固定在4%福尔马林中。

结论
荧光图像的采集和分析

通过结合使用细胞成像分析系统,即可获得3D细胞培养物的共聚焦荧光图像(如:488 nm和561 nm)。先使用最大荧光强度投影处理荧光发光度数据,然后使用分析软件和细胞计数识别细胞核。添加顺铂96小时后,微球中HT-29细胞的数量如图1所示。对双色信号的分析表明,使用顺铂处理3D细胞培养可减少细胞周期的G0和G1期以及细胞数量(图2和3)。

图1:微球中的HT-29细胞数量存在顺铂浓度依赖性 图2:微球内细胞周期变化的顺铂浓度依赖性  图3:微球的双色图像

Olympus为注册商标,NoviSight和Insightful Analysis、Intelligent Answers均为Olympus Corporation的商标。

Products used for this application

3D细胞分析软件

NoviSight

  • 从完整结构到亚细胞级别的3D图像识别
  • 统计分析
  • 多种默认检测方法

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