对药物处理的反应 - 3D细胞培养的细胞周期分析

抗癌药对3D细胞培养的影响可以通过细胞成像进行评估。
与细胞周期指示剂Fucci结合使用，就可以研究抗癌药对细胞周期的影响。

目的

除常规的2D细胞培养外，3D细胞培养近期还被用于抗癌药物的机理研究。本研究从细胞周期以及细胞死亡的角度分析3D培养细胞对药物的反应。

样品的制备

Fucci是一种采用双色方案的细胞周期指示剂。将表达Fucci的转基因HT-29细胞的细胞悬液种入U型底96孔板中。细胞培养开始后72小时，将细胞培养物暴露于连续稀释的顺铂（0-10 nM）中。孵育96小时后，从细胞培养物中除去含有顺铂的培养基，并将其固定在4％福尔马林中。

结论
荧光图像的采集和分析

通过结合使用细胞成像分析系统，即可获得3D细胞培养物的共聚焦荧光图像（如：488 nm和561 nm)。先使用最大荧光强度投影处理荧光发光度数据，然后使用分析软件和细胞计数识别细胞核。添加顺铂96小时后，微球中HT-29细胞的数量如图1所示。对双色信号的分析表明，使用顺铂处理3D细胞培养可减少细胞周期的G0和G1期以及细胞数量（图2和3）。

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