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特征

高分辨率的深层成像,无样品损伤

显微镜框架

正置框架

FV1200MPE正置机架方案致力于执行多光子显微镜任务。该机架允许最终用户形成最优化系统,在实验期间需要同步激光刺激和膜片钳信号。专用高数值孔径(NA)聚光器检测透射光二次谐波(SHG)信号。

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倒置框架

倒置机架适合延时观察厚的活标本,如培养的组织,培养的三维细胞。倒置机架系统对通过活体窗口进行器官和组织活体延时观察也非常实用。

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激光扫描系统

更明亮和更深层的成像,损伤也更小

在多光子显微成像时,在焦平面使用窄脉冲宽度,最大程度地提高了荧光激发效率。然而,飞秒激光通过光学部件时,脉冲宽度会分散,当光束离开物镜时会拓宽脉冲宽度。激光束调整光学系统配备有一种色散补偿功能,准确反转了由显微镜光学部件产生的脉冲宽度分散 (负向调整群组色散延迟) ,修复为适合样品的理想脉冲宽度。

自定义调节出口激光束

FV1200MPE配备有AOM来调节激光。AOM可以改变激光强度,并具备在微秒之间快速打开/关闭激光的能力。这可以使激光输出限制在感兴趣的区域,避免了周围区域的荧光激发。观察厚样品时,可以根据样品深度调节激光强度和PMT电压,在不改变图像亮度的前提下采集图像。

激光束自动调节功能

由于激光强度是以高斯分布,要实现高效的多光子激发,激光束在进入物镜的时候,必须填满瞳孔的直径。FV1200MPE扩束镜会根据物镜和激发波长自动调整光束直径。为多光子激发显微成像优化了激光束特性。

新型的反光镜设计提高激发效率

奥林巴斯的振镜采用了创新的银镀膜,在带宽上 (从可见光到近红外光) 提供了卓越的反射性能。XY扫描振镜的总反射率也得到改善,在近红外范围的反射率比传统铝镜高出25%。另外,当功率相同的情况下,与FV1000MPE相比,反射率的提
高可以将多光子激发效率提高50%,使该反射镜成为深度观察的理想产品。

检测系统

宽视场设计的高灵敏检测器

在多光子激发中,荧光从样品内部的焦点射出。细胞和组织成分
会散射光线,使光线从离入射光束有一定距离的样品表面射出。由于配置了宽视场的设计,FV1200MPE可以最大程度地捕捉包括散射光的荧光信号,提供高效的散射组织荧光成像。

正置显微镜用高灵敏GaAsP检测器

使用精心挑选的磷砷化镓 (GaAsP,具有45%QE) 的检测器可以在荧光极其微弱的情况下采集高信噪比图像。

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反射荧光检测器

荧光信号不仅极其微弱,而且分散在厚样品的内部,使得信号强度更加微弱。FV1200MPE的检测器安装在样品附近,最大限度地提高检测效率。

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透射荧光检测器

多光子成像用高数值孔径聚光镜和透射荧光检测器检测从焦平面射出的荧光和样品内的散射光。该透射光检测器可以非常高效地检测荧光,特别是样品深层的散射光。

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多光子显微成像专用物镜

已校正的光衍射可提供深度成像

样品内的折射率差异会分散焦点,为深度成像造成困难。得益于自身的校正环,FV1200MPE专用物镜会补偿不匹配的折射率,使得可以在不损失能量密度的情况下,在样品深部形成一个理想焦点。

把成像技术带入新的“深”度

Olympus通过创新的科技实现了在极深的组织内部对透明生物样品进行高精度成像。其中包括多光子成像专用4毫米工作距离物镜和使得生物样品透明化的全新试剂。

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了解更多光学清洁剂SCALEVIEW-A2

强大的性能实现优异的高速成像

刺激系统

同步多光子成像与刺激

用户可以根据需要调节光刺激的参数,而不是仅局限于成像的设置。这是因为系统采用了独立的FV1200第二组扫描振镜 (SIM) 进行激光刺激 (作为选配件提供) 。通过连接到SIM扫描振镜,第二套多光子激光可在用于成像的焦平面上进行同步刺激。

多光子解笼锁和荧光检测到的单个树突棘的钙信号
a) 通过海马齿状回成像显示的树突棘叠加的荧光图像 (830 nm激发) 。全细胞记录。注射了Alexa594和钙指示剂OGB-5N。在单个树突脊 (红色) 的顶部进行了多光子解笼锁实验,并注射了谷氨酸 (720 nm激发) 。对从顶部到单个树突棘,朝向树突主干的线路 (连接2个三角形的线路) 进行单线扫描。
b) ,c) ,对Alexa 594和OGB-5N进行同步线扫描
d) 钙离子浓度由OGB-5N和Alexa594的荧光发射率确定。
e) 树突棘顶部钙浓度的变化 (H,黑色) ,树突主干钙浓度的变化 (D,红色) ,全细胞记录NMDA受体 (I NMDA) 的电流。通过这些观察,可以明显看见钙离子通过树突棘顶部的NMDA受体流入主干。

转载自Noguchi et al. Neuron 46 (2005) 609-622。
Jun Noguchi, Haruo Kasai
Center for Disease Biology and Integrative Medicine, Faculty of Medicine,
University of Tokyo

多光子和可见光刺激

多点刺激软件 (可选配) 提供在单个实验中切换IR和可见光的连续刺激。例如,实施多光子激发的解笼锁实验之前,可以直接先进行通道视紫红蛋白的可见光刺激,而不需要停止图像采集。

光刺激整合DM的示例

例如,以下是分光镜示意图,可见光可以完成488 nm和559 nm的刺激;然后IR光可以使用920 nm的激发,并进行观察。

多功能成像和测量

扫描模式的多种选择

FV1200MPE标配了AOM,能够精确的控制成像和光刺激的位置和时间。使用Olympus龙卷风扫描模式可以对实验中所需的区域进行快速漂白和光刺激。

高速光遗传学和解笼锁应用

标准光栅扫描方式不具备高速、高信噪生理测量的能力。Olympus全新多位点图谱高级软件 (MMASW) 为科研工作者进行最严苛的高速测量提供了平台。类似于随机存取扫描和目标路径扫描等方式让用户可以根据需要自由选择快速多点测量或刺激路径。
每个扫描位置均可以扩展为大区域。
镀银振镜控制扫描,确保可见光和IR激光能够进入整个视场,优秀的光通量确保了多色扫描的性能。
细胞网络波动测量每秒高达101次,每个位置的数据输出多达50,000 Hz。高信噪捕捉所有您需要的数据。
使用信息图谱功能能够快速识别荧光波动位置或高信号区,并自动分配高速测量的位置。
进行光遗传学或解笼锁实验时,细胞图谱会响应Olympus独特SIM扫描振镜的同步刺激 (仅适用于FV1200MPE BASIC 和TWIN) 。
与电生理学或其他外部设备的同步检测。
高速电生理学实验、钙离子测量、光遗传学和FRAP/ FLIP实验。SIM扫描振镜与成像的同步实现,确保了刺激过程中,或刚刚结束刺激之后可以迅速采集发生的细胞响应。
刺激/成像位置和激光波长可以通过两个独立的光束分别设置。

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同步激光刺激和膜片钳

FV1200MPE模拟单元可以将电压转换成图像,并像处理荧光图像一样处理该图像,从而使得通过膜片钳测量的多通道光刺激电信号可以与图像采集同步呈现,并以伪彩色显示。

请链接到FV1200模拟单元页面

电生理学和快速测量

观察区域被划分成小网格,激光分别照射被分隔的区域,并将相邻区域排除在激光刺激范围外。信息图谱和多点软件提供多位点自动刺激 (可选购软件) 。

Z轴亮度补偿

随着厚样品成像深度的增加,样品亮度通常会降低。该功能可以一边连续采集焦平面的图像,一边改变检测器的灵敏度和激光功率,允许在不丢失样品厚区域信息的前提下得到高灵敏度和高精度的图像。

用于小动物实验的镜臂高度抬升套件

镜臂高度抬升套件提供了额外的40毫米空间,并安装在显微镜镜架和反射光照明装置之间。更加便于进行小动物的实验。

多种可选的系统配置

M系统:多光子专用M扫描振镜

该多光子专用系统没有配备可见光激光。多光子显微镜优化的光学部件允许对样品进行精度更高、操作更简单,而且更深层的成像。该系统采用一组镀金扫描振镜。

B系统:多光子用标准扫描振镜

该系统配备有多光子成像用IR激光和可见光激光,适用于深层次的多光子显微成像和可见光共聚焦成像。
该系统专用于各种成像应用,包括活细胞和体内成像。
*将系统与双激光耦合器配套使用可以进行多光子成像和可见光刺激。

S系统:多光子激光刺激

本系统配备有用来刺激的IR激光和独立扫描振镜。除了一般的多光子显微成像以外,该系统还允许在可见激光成像过程中实施多光子激发的精确光刺激。
*多光子显微成像不支持某些图像采集模式,比如时间控制器。

T系统:多光子成像和刺激

该系统可以同步两个独立IR激光的激光来进行刺激和成像。它具备了可视化组织深部多光子成像的能力,同时也可以进行精确的多光子激发3D刺激,例如,刺激位于组织深部的单个树突棘。新推出的SIM双端口功能允许SIM扫描振镜使用可见光激光和IR激光精确刺激。

激光共享系统

该系统允许两台显微镜共享一个激光器。示例:B系统(基本系统)与M系统(多光子专用系统)共享一个激光器。B系统的BX61WI和M系统的BX61WI共用一个激光。

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标准共聚焦显微成像用可见激光

激光耦合器使得以下所有二极管激光器都可以配套使用:405nm、440nm、473nm、559nm和635nm。该系统也可以搭载传统的多线Ar激光和HeNe-G激光。

双输出型

耦合器采用两根光纤输出激光。激光既可以用于观察,也可以用于光刺激。

链接到“FV1200激光耦合器,双输出页面”

单输出型

耦合器采用单根光纤输出进行可见光观察。标配AOTF。

链接到“FV1200单光纤输出激光耦合器页面”

FLUOVIEW FV1200MPE femtoCARS Add-on

The femtoCARS equipped FV1200MPE provides a label-free lipid imaging capability based on molecular vibrations using the Coherent Anti-Stokes Raman Scattering (CARS) microscopy method.

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