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Nota de aplicación

Evaluación de la eficacia de fármacos: respuesta de esferoides cocultivados a los fármacos


La observación confocal combinada con la utilización del sistema permite evaluar la eficacia del fármaco en esferoides cocultivados, teñidos con un colorante fluorescente apropiado.

Objetivos

La mayoría de ensayos de eficacia para fármacos anticancerígenos se han basado en la utilización de células inmovilizadas, cultivadas como monocapas 2D. Sin embargo, estas monocapas 2D no pueden recapitular el entorno nativo complejo de las células cancerígenas, como las que tienen una estructura 3D. Por lo tanto, los cultivos celulares 3D como los esferoides están suscitando mucha atención. Además, los sistemas de esferoides cocultivados formados por dos o más tipos de células han demostrado ser útiles en el estudio de los mecanismos de activación celular o interacción intercelular. En este estudio, se investigó el efecto de la cloroquina (CHL) en esferoides cocultivados formados por U20S y HT-29 a través del análisis de imágenes fluorescentes con el sistema.

Objectives

Preparación de muestras

Se cultivó una suspensión celular que contenía HT-29 y U20S transgénico, expresada en YFP dentro de una placa PrimeSurface® 96U (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) con una proporción de 50 células de U20S transgénicas/pocillo y 450 células HT-29/pocillo. Se añadió CHL diluido en serie a cada pocillo 48 horas después del inicio del cultivo celular. Se añadió Hoechst 33342 (colorante nuclear) y yoduro de propidio (PI: colorante para células muertas) en cada pocillo 48 horas después de la incorporación del CHL. La observación de la fluorescencia de YFP permite distinguir el U20S de la HT-29.

Conclusión
Adquisición y análisis de imágenes fluorescentes

Se obtuvieron imágenes fluorescentes de los esferoides mencionados anteriormente. Como puede verse en las figuras, los esferoides cocultivados perdieron su integridad estructural 3D en la estructura 3D con el aumento de la concentración de CHL. El dato interesante fue que las células HT-29 se dispersaron por completo, mientras que las células de U20S (pseudoverde) permanecieron agregadas. Paralelamente, la proporción de células muertas (pseudorrojo) con respecto a todas las células (pseudoazul) en cada pocillo aumentó con el incremento proporcional del CHL. Los índices pueden visualizarse gráficamente con respecto a la concentración de CHL usando los resultados de la identificación y el recuento de núcleos con el software de análisis. Estos resultados indicaron que la eficacia del fármaco puede evaluarse fácilmente usando los esferoides cocultivados en una microplaca.

Conclusion

PrimeSurface es una marca registrada de Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus es una marca registrada, y NoviSight and Insightful Analysis, Intelligent Answers son marcas comerciales de Olympus Corporation.

Productos usados para esta aplicación

Software de análisis celular 3D

NoviSight

  • Reconocimiento de imagen 3D de la estructura global al nivel subcelular
  • Análisis estadístico
  • Diversos ensayos predeterminados

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