La source de lumière est l’une des pièces les plus importantes de votre microscope. Un bon éclairage permet d’observer vos échantillons de manière optimale, mais aussi de prendre des images et d’analyser les données dans de bonnes conditions. En fonction du type de source de lumière d’excitation de fluorescence utilisée (lampe à vapeur de mercure, lampe aux halogénures métalliques à vapeur de mercure ou LED), il est possible d’améliorer votre système de différentes manières.
Cet article est le deuxième article de notre série relatif aux améliorations apportées aux microscopes. À cette occasion, nous allons vous donner des conseils pratiques pour optimiser votre source de lumière pour fluorescence.
Lampes à vapeur de mercure
Les lampes à vapeur de mercure traditionnelles sont généralement montées dans un boîtier de lampe fixé directement sur le microscope. Toutefois, sur certains systèmes tels que les microscopes confocaux, le faisceau lumineux est conduit par un guide de lumière. Pour accroître la durée de vie de ces sources de lumière, appliquez ces quatre bonnes pratiques tout en respectant les instructions du fabricant :
Allumer et éteindre la lampe moins fréquemment :
Vous devez vous absenter de la pièce quelques instants ? Laissez la lampe allumée ! Le fait d’allumer et d’éteindre constamment une lampe réduit sa durée de vie. Bien que certains blocs d’alimentation de lampes au mercure soient dotés d’une fonctionnalité de temps d’attente pour refroidissement vous empêchant d’allumer et d’éteindre trop fréquemment l’ampoule, gardez à l’esprit que cette fonctionnalité peut aussi vous aider à augmenter la durée de vie de l’ampoule.S’assurer que votre ampoule est récente :
L’intensité des ampoules au mercure commence à décliner après seulement 70 heures d’utilisation. Au bout de 200 heures, leur intensité est bien plus faible. Assurez-vous de changer votre ampoule selon la durée de vie préconisée (200 ou 300 heures). Jetez toujours ces ampoules conformément à la politique de votre entreprise en matière de déchets dangereux.Aligner l’ampoule :
Un bon alignement permet d’obtenir un éclairage homogène du champ. Consultez votre manuel d’utilisation pour connaître la procédure à suivre concernant votre boîtier de lampe. Pour vérifier facilement si votre ampoule est correctement alignée, il vous suffit de placer une carte en papier blanc sur la platine du microscope (la carte de visite de votre représentant Olympus fera l’affaire). Ensuite, observez-la à faible grossissement sous une lumière d’excitation bleue. La cellulose étant naturellement fluorescente, tout éclairage inégal pourra être rapidement identifié.Avoir une ampoule de rechange sous la main :
En cas de défaillance d’une ampoule, ayez toujours sous la main au moins une ampoule de rechange. Parfois, les vieilles ampoules au mercure ne s’allument tout simplement plus. Or, vous n’avez pas envie de vous retrouver sans ampoule au moment d’acquérir des images de vos échantillons. Rappelez-vous de changer l’ampoule suivant les instructions du fabricant (généralement après 200 à 300 heures d’utilisation, selon l’ampoule) et de jeter l’ancienne ampoule avec les déchets dangereux à base de mercure.
Systèmes à ampoule aux halogénures métalliques et vapeur de mercure
Les systèmes à ampoule aux halogénures métalliques et vapeur de mercure utilisent une ampoule aux halogénures métalliques dopée au mercure précentrée à longue durée de vie. Ces ampoules ont généralement une durée de vie de 2 000 heures et sont installées précentrées au niveau de l’unité d’alimentation principale. Bien qu’il existe sur le marché quelques unités directement montées sur le microscope, l’éclairage est généralement conduit vers le microscope au moyen d’un guide de lumière liquide (LLG).
Exemple d’une lampe aux halogénures métalliques
De telles sources de lumière maintiennent une intensité lumineuse relativement stable lors des 1000 premières heures d’utilisation, seuil après lequel l’intensité commence à baisser. Consultez les informations techniques du fabricant pour connaître l’évolution du spectre d’émission dans le temps et les instructions de remplacement. Comme avec les ampoules au mercure, vous devrez jeter les ampoules usagées conformément à politique de votre entreprise relative aux déchets dangereux.
De nombreuses personnes ne se rendent pas compte que le LLG se dégrade à mesure qu’il est sollicité et qu’il est bien moins efficace après 4 à 6 000 heures d’utilisation. Si l’unité d’alimentation principale est dotée d’un obturateur intégré, utilisez celui-là plutôt que celui du microscope afin de bloquer la lumière d’excitation. En faisant cela, vous pourrez préserver l’efficacité du LLG plus longtemps.
Vous devrez tout de même prévoir de changer le guide de lumière liquide après le second ou troisième changement d’ampoule. Les guides de lumière liquides n’ont pas besoin d’être centrés, mais doivent être bien ancrés dans le bloc d’alimentation et dans l’adaptateur du guide de lumière liquide monté sur le microscope. Assurez-vous de suivre les instructions du fabricant pour le remplacement du guide de lumière liquide.
Les guides de lumière liquides conduisent la lumière jusqu’au microscope
Sources de lumière à LED
Passer d’une source de lumière pour fluorescence au mercure à une unité à diodes électroluminescentes (LED) présente de nombreux avantages pour les performances du microscope et facilite la maintenance, notamment :
- Des pics spectraux plus lumineux qu’avec une lampe au mercure
- Un allumage et une extinction instantanés, sans temps d’allumage
- Une durée de vie très longue (20 000 heures ou plus)
- Pas besoin d’acheter ou d’aligner des ampoules (hourra !)
- Des lampes respectueuses de l’environnement grâce à une plus faible consommation d’électricité et à l’absence de mercure
Aux longueurs d’onde clés telles que 488, 568 et 647 nm, de nombreuses sources LED produisent un pic d’émission plus lumineux que celui des ampoules au mercure. Les modèles disponibles sur le marché sont dotés de trois à seize longueurs d’onde d’excitation indépendantes et à commutation rapide.
Les sources lumineuses à LED ont des temps d’allumage et d’extinction très rapides. En outre, la plupart de ces sources proposent des intensités variables tandis que certaines offrent des longueurs d’onde variables. Elles peuvent obturer la longueur d’onde à l’aide d’une commande manuelle ou la déclencher à l’aide d’un périphérique USB ou à un signal logique transistor-transistor (TTL) depuis votre PC/logiciel. Ces sources lumineuses qui offrent des longueurs d’onde pouvant être déclenchées de manière individuelle sont idéales pour faire d’un vieux microscope manuel un microscope à fluorescence automatique et multicanal (avec un jeu de filtres multicanaux). Allez encore un peu plus loin et ajoutez un dispositif Z-focus, un caisson environnemental et un logiciel adapté pour convertir ce vieux microscope inversé en un système d’imagerie de cellules vivantes à intervalles.
Les systèmes à LED sont bien plus faciles à utiliser, car aucun alignement n’est nécessaire et aucune ampoule ne doit être changée. Ils ont une durée de vie de dizaines de milliers d’heures, ne contiennent pas de mercure et sont économes en électricité. Par conséquent, ils permettent d’accroître la gamme d’applications de votre vieux microscope, et ce, pour un coût de propriété total plus faible.
Découvrez d’autres conseils de nos experts pour améliorer vos microscopes
Nous pensons qu’il devrait être facile de tirer un meilleur parti de votre système de microscopie actuel. C’est pourquoi nous avons créé une série d’articles de blogue sur le sujet, et ce, afin de s’assurer que le processus soit aussi simple (et sans stress !) que possible.
Si vous ne l’avez pas encore lu, consultez le premier article de notre série sur les améliorations à apporter aux microscopes : Cinq conseils pour prolonger la durée de vie et rehausser les performances de votre microscope. Si vous souhaitez pouvoir effectuer de simples mises à niveau pour améliorer la stabilité de l’imagerie de cellules vivantes, guettez la publication de notre prochain article.
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