생명과학 솔루션
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형광 이미지 분석–콜라겐 겔 내 3D 스페로이드 침습


종양 침습 관련 인자를 표적으로 한 항암 약제의 영향을 측정하기 위해 NoviSight™ 소프트웨어를 사용하여 콜라겐 겔 내 암 스페로이드 침습의 컨포칼 이미지를 정량적으로 평가하였습니다.

목적

전이 캐스캐이드는 침습, 혈관내 이물주입 및 혈관외유출 등 세 가지 주요 과정으로 크게 분리될 수 있습니다. 첫 번째 단계인 종양 침습은 종양 진행의 기초가 되며 전이의 원동력입니다. 또한 종양 침습은 세포외 매트릭스(ECM)의 분해, 세포내 부착 분리 및 세포 이동 등 세 가지 과정으로 구성됩니다. ECM은 콜라겐, 파이브로넥틴, 라미닌, 프로테오글리칸 같은 세포외 분자의 집합이며 복잡한 망을 형성합니다. 종양 세포는 ECM의 분해 및 복원을 반복하면서 집단으로 이동합니다 . 침습 용량 또는 약효를 평가하기 위해, 상처 치료 분석 또는 트랜스웰 분석이 일반적으로 사용됩니다. 이러한 기존 분석은 단순하고 저렴하지만 종양의 미세환경이 부족하며 세포는 편광 및 세포간 소통 같은 관련 속성을 상실합니다. 따라서 이러한 인위적인 분석은 체외 및 체내 실험 간 화합물 효능의 열악한 예측 값의 원인이 됩니다 . 종양 미세환경을 재생성하기 위해 3차원의 겔내 침습 분석을 점차적으로 확대하였습니다. 이 분석은 종양 스페로이드를 겔 매트릭스에 내장시켜 종양 미세환경을 재생성할 수 있습니다. 내장된 스페로이드는 겔 안으로 점차 발아합니다. 이 분석은 종양 형태 또는 침습의 집합성을 면밀히 모방할 수 있습니다. 본 연구에서는 NoviSight™ 소프트웨어 및 3D 겔내 침습 분석을 사용하여 침습성 스페로이드에 미치는 항암제의 영향을 정량적으로 분석하였습니다. 연구 결과, 복합형 종양의 침습을 정량화하는 소프트웨어의 기능이 입증되었습니다.

목적

샘플 제공

인체 섬유육종 세포 HT1080의 세포 현탁액을 U자형 바닥 96웰 플레이트(Corning® Inc.)에 파종하였습니다(1일차). 3일차에 HT1080 스페로이드를 매트리겔(Corning® Inc.)에 내장시키고 특히 매트릭스 메탈로프로티아나제(MMP)를 억제하는 항암제인 Batimastat가 포함된 배지를 매트리겔 위에 추가하였습니다. 5일차에 세포 핵을 Hoechst33342로 착색하였습니다.

결론
형광 이미지의 획득 및 분석

FV3000 레이저 컨포칼 현미경을 사용하여 관찰하였습니다. 5일차에 비처리 스페로이드는 강력한 침습을 보였지만(A), Batimastat가 있는 데서 침습이 억제되었습니다(B). 침습 영역과 복합 3D 구조가 NoviSight™ 소프트웨어(C: 빨간색 영역이 스페로이드의 중심이며, 파란색 영역이 침습의 투사 부분임)에 의해 인식되었습니다. 소프트웨어의 부피 분석 기능을 사용하여, Batimastat가 투여 의존적 방식으로 HT1080 스페로이드 침습을 억제하였음을 판단할 수 있었습니다(D).

결론

U자형 바닥 96웰 플레이트는 Corning®Inc의 등록 상표입니다.
Olympus는 등록 상표이며 NoviSight 및 Insightful Analysis, Intelligent Answers는 Olympus Corporation의 상표입니다.

이 애플리케이션에 사용되는 제품

3D 세포 분석 소프트웨어

NoviSight

  • 전체 구조에서 아세포까지 3D 이미지 인식
  • 통계 분석
  • 다양한 기본 분석

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