Tiefere Einblicke in lebende Strukturen durch Lichtscheibenmikroskopie

Dieses Webinar gibt Ihnen eine Einführung in die Lichtscheibenmikroskopie. Das Lichtscheibenmikroskop Alpha3 erreicht durch eine sehr dünne optische Schnittführung und die hochwertige Optik von Olympus eine hochauflösende 3D-Bildgebung von lebenden und fixierten biologischen Proben. Das Mikroskopiesystem Alpha3 integriert modernste Technologien zu einer noch nie dagewesenen Bildqualität bei erhöhter subzellulärer Auflösung. In diesem Webinar lernen Sie ein äußerst vielseitiges und modulares Lichtscheibensystem für die Routine- bzw. Grundlagenforschung kennen, das von der Makro- bis zur Mikroaufnahme kompletter Organe bis zu sehr kleinen Proben alles abdeckt.

Befestigung großer Proben

Befestigung kleiner Proben

Schlüsseltechnologien sorgen für überlegene Bildqualität

3D-Bild eines kompletten Zebrafischgehirns

3D-Bild einer kompletten Zebrafischlarve

3D-Bild eines kompletten Mausgehirns

Häufige Fragen

Webinar FAQs | Tiefere Einblicke in lebende Strukturen durch Lichtscheibenmikroskopie

Wie hoch ist die maximale Auflösung des Alpha3 Systems in der x/y-Ebene und entlang der z-Achse?

Die maximale Auflösung in der x/y-Ebene ergibt sich aus der physikalischen Länge der Pixel der Kamera geteilt durch die Vergrößerung des Objektivs. Zum Beispiel beträgt die maximale Auflösung bei 40X 6,5 µm/40 = 0,16 µm.

Bei der Lichtscheibenmikroskopie ist die maximale Auflösung entlang der z-Achse durch die Breite des Lichtblatts begrenzt—2 µm ist das dünnste Lichtblatt, das im Alpha3 System möglich ist. Bei Vergrößerungen über 10X kann die Probe mikrometerweise gescannt werden. Das Nyquist-Shannon-Abtasttheorem begrenzt dann die maximale Auflösung in der z-Ebene auf das Doppelte, also auf 2 µm.

Welche Arten von Lasern werden in der Lichtscheibenmikroskopie verwendet und welche durchschnittliche Leistung haben sie?

Wir können 4 bis 6 Laserlinien in die Kombinierer integrieren. Dabei handelt es sich meist um Laserdioden, mit Ausnahme der 561er-Linie, bei der es sich um einen DPS-Laser handelt, der einen Modulator zum Einstellen der Leistung benötigt. Die durchschnittliche Leistung liegt meist zwischen 50 und 100 mW.

Kann das Alpha³ System eine Doppelkamera verwenden?

Die meisten Konfigurationen sind mit einer Kamera flexibel genug, obwohl auch zwei Kameras installiert werden können.

Kann das Alpha³ System mehrfarbige Aufnahmen machen?

Es gibt zwei Möglichkeiten für Multicolor-Bildgebung mit dem Alpha³ System. Bei der ersten Methode wird derselbe Bereich der Probe mehrmals gescannt, wobei jedes Mal der Laser und der Emissionsfilter gewechselt werden.

Die zweite Methode ist der „Blinkmodus“, bei dem ein Bandsperrfilter nach dem Objektiv eingesetzt wird, der das gesamte Breitbandspektrum durchlässt, aber die Laserlinien ausblendet. Auf diese Weise können wir die Probe einmal scannen und jeden Laser für jede Schicht aufblinken lassen. Diese Methode ist schneller und bietet eine viel bessere Kolokalisierung in lebenden Proben.

Können IR-Laser für die Multiphotonen-Lichtscheibenmikroskopie in das Alpha³ System integriert werden?

Derzeit ist 730 nm die längste verfügbare Wellenlänge des sichtbaren Spektrums, aber wir beschäftigen uns bereits mit Multiphotonen-Anwendungen.

Können Daten, die mit dem Alpha3 System erzeugt wurden, mit herkömmlichen Dekonvolutionsalgorithmen analysiert werden?

Ja, für die erzeugten Daten kann eine Dekonvolution durchgeführt werden, und diese Analyse wurde bereits von Olympus durchgeführt.

Können Bilder, die mit dem Alpha³ System aufgenommen wurden, zur Dekonvolution in eine Open-Source-Plattform exportiert werden?

Die im Lieferumfang des Alpha³ Systems enthaltene Software erzeugt Bilder, die von jeder Open-Source-Software geöffnet werden können. Das für die Bildverarbeitung verwendete System muss jedoch in der Lage sein, große Datensätze von 300–800 GB zu laden und zu verarbeiten.

Gibt es besondere Anforderungen an die Datenverarbeitung oder die Bildspeicherung in der Lichtscheibenmikroskopie?

Das Alpha³ System wird mit einem Computer geliefert, der über genügend Speicher verfügt, um große Datenmengen zu verarbeiten. Dennoch empfehlen wir zur langfristigen Speicherung die Verwendung eines Servers. Außerdem hat es sich bewährt, die Daten so schnell wie möglich nach der Erfassung auf einen Server zu laden.

Was ist die höchste Erfassungsgeschwindigkeit für die optische Durchfokussierung?

Durch die optische Durchfokussierung wird die Erfassungsrate um den Faktor 4 verlangsamt. Bei einer Belichtungszeit von 10 ms erreicht man z. B. eine Bildzeit von 40 ms, was 20 Bilder/Sekunde ergibt.

Wie einfach ist es, die Probenhalter und die Klemmen zu sterilisieren?

Alle Teile bestehen aus medizinischem Edelstahl und sind chemikalien- und korrosionsbeständig sowie inert. Sie können zur Sterilisation autoklaviert oder in reines Ethanol getaucht werden.

Welche Kamera ist im Lieferumfang des Alpha³ Systems enthalten?

Das System ist mit der digitalen CMOS-Kamera ORCA-flash 4.0 ausgestattet. Die Kamera besitzt einen 2048 × 2048 Sensor, die Pixelgröße beträgt 6,5 µm.

Ist das Alpha³ System mit einer schnellen Netzwerkkarte für die Datenübertragung ausgestattet?

Wir bieten 1, 10 und 100 GHz-Optionen für die Datenübertragung, können aber auch kundenspezifische Wünsche erfüllen.

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