Surveillance de la formation de sphéroïdes dans les plaques multipuits à fond en U à l’aide d’un système de surveillance de l’incubation

Plan expérimental

Les sphéroïdes sont des agrégats de cellules 3D conçus pour imiter les caractéristiques des tissus in vivo, ce qui en fait des outils précieux pour mener diverses évaluations, comme l’analyse du potentiel de différenciation des cellules souches ou de l’efficacité des médicaments. Les plaques à fond en U sont souvent utilisées pour la formation de sphéroïdes. Cette expérience a été menée pour évaluer les avantages de l’utilisation du système de surveillance de l’incubation Olympus Provi™ CM20 pour la surveillance de la formation de sphéroïdes dans les plaques à fond en U.

Procédure expérimentale

Une plaque à 96 puits à fond en U (Sumitomo Bakelite, cat. n^o MS-9096U) a été ensemencée avec des cellules souches neurales de souris à une densité de 2500 cellules/0,1 mL/puits dans du milieu Knock Out DMEM/F-12 enrichi de 1x B27, 1x GlutaMax, 20 ng/mL de bFGF, 10 ng/mL d’EGF, 0,0002 % d’héparine, et 1 % de pénicilline-streptomycine.

La plaque à 96 puits préparée a été placée sur le système de surveillance d’incubation Provi CM20. La position de mise au point a été réglée manuellement et les cellules ont été imagées automatiquement par le système CM20 toutes les heures pendant une période de 60 heures pour surveiller la formation de sphéroïdes.

Résultats

Figure 1. Formation de sphéroïdes à partir de cellules souches neurales de souris

L’évaluation des images acquises nous a permis de conclure qu’après l’ensemencement, les cellules se sont agrégées rapidement et ont formé des sphéroïdes en environ 10 h, qui ont ensuite progressivement augmenté de taille.

Avantages de l’évaluation de la culture cellulaire à l’aide du système CM20

L’imagerie avec le système Provi CM20 a été réalisée avec succès à l’aide de plaques à fond en U. Un avantage majeur de cette méthode est que les cellules peuvent rester dans l’incubateur, ce qui évite de les perturber et atténue l’incidence du processus d’imagerie sur la formation de sphéroïdes. Cette expérience montre également qu’avec le CM20, la position de mise au point n’a besoin d’être réglée qu’une seule fois et peut être ensuite maintenue pendant plusieurs jours, même pour des objets en suspension. En nous fondant sur ces résultats, nous pouvons conclure que le système Provi CM20 peut être utilisé pour effectuer une analyse séquentielle à haut débit avec des plaques à 96 puits à fond en U. Cela est particulièrement utile pour la sélection de médicaments dans des modèles de tumeurs sphéroïdes. Nous prévoyons également que le système CM20 pourra être utilisé pour surveiller la différenciation des cellules souches (par exemple, les cellules souches neurales) ou des corps embryoïdes (EB), et nous avons l’intention de tester cette méthode pour ce type d’applications dans de futures expériences.

Remerciements

Cette note d’application a été rédigée avec l’aide du chercheur suivant :
Dr Takahiro Yamaguchi, chercheur principal, ACEL, Inc.

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