Überwachung der Sphäroidbildung in Multiwell-Platten mit U-Boden mit einem Inkubationsüberwachungssystem

Experimenteller Abriss

Sphäroide sind 3D-Zellaggregate, die die Eigenschaften von Gewebe in vivo nachahmen und deshalb für eine Reihe von Untersuchungen wertvoll sind, z. B. für die Prüfung des Differenzierungspotenzials von Stammzellen oder die Prüfung der Wirksamkeit von Medikamenten. Für die Sphäroidbildung werden häufig U-Boden-Platten verwendet. Dieses Experiment wurde durchgeführt, um die Vorteile des Olympus Provi CM20 Inkubationsüberwachungssystems bei der Überwachung der Sphäroidbildung in U-Boden-Platten zu bewerten.

Experimentelles Verfahren

Neurale Maus-Stammzellen wurden auf einer 96-Well-Platte mit U-Boden (Sumitomo Bakelite, Kat.- Nr. MS-9096U) in einer Dichte von 2.500 Zellen/0,1 ml/Well unter Verwendung von Knock Out DMEM/F-12 mit 1x B27, 1x GlutaMax, 20 ng/ml bFGF, 10 ng/ml EGF, 0,0002 % Heparin, 1 % Penicillin-Streptomycin ausgesät.

Die vorbereitete 96-Well-Platte wurde auf das Provi CM20 Inkubationsüberwachungssystem gestellt. Die Fokusposition wurde manuell eingestellt, und die Zellen wurden über einen Zeitraum von 60 Stunden einmal pro Stunde automatisch von dem CM20 System fotografiert, um die Sphäroidbildung zu überwachen.

Ergebnisse

Abbildung 1. Sphäroidbildung ausgehend von neuralen Maus-Stammzellen

Anhand der aufgenommenen Bilder konnten wir feststellen, dass die Zellen nach dem Aussäen schnell zusammenwuchsen, innerhalb von etwa 10 Stunden Sphäroide bildeten und dann allmählich an Größe zunahmen.

Vorteile der Zellkulturbewertung mit dem CM20 System

Das Provi CM20 System nahm automatisch Bilder der U-Boden-Platten auf. Dies ist ein großer Vorteil, da die Zellen ungestört im Inkubator verbleiben können und die Aufnahme von Bildern keine Auswirkung auf die Sphäroidbildung hat. Dieses Experiment zeigt auch, dass die Fokusposition mit dem CM20 nur einmal eingestellt werden muss und dann mehrere Tage lang beibehalten werden kann, selbst wenn sich die Objekte in einer Suspension befinden. Die Ergebnisse lassen den Schluss zu, dass das Provi CM20 System für die Durchführung von Zeitrafferanalysen mit hohem Durchsatz unter Verwendung von 96-Well-Platten mit U-Boden verwendet werden kann. Dies ist besonders nützlich für die Überprüfung der Wirksamkeit von Medikamenten in Sphäroid-Tumormodellen. Wir gehen davon aus, dass das CM20 System auch zur Überwachung der Differenzierung von Stammzellen (z. B. neuralen Stammzellen) oder sogenannten Embroid-Körperchen (EB) verwendet werden könnte, und wir beabsichtigen, diese Methode in zukünftigen Experimenten für solche Anwendungen zu testen.

Danksagungen

Dieser Anwendungshinweis wurde unter Mitarbeit der folgenden Wissenschaftler verfasst:
Takahiro Yamaguchi, PhD, Principal Researcher, ACEL, Inc.

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