Você tem novas aplicações de pesquisa de células vivas de longo prazo ou organismos modelos, mas não tem certeza se o seu microscópio de pesquisa invertido mais antigo pode lidar com elas? O custo de um novo microscópio invertido está fora do seu orçamento atual? Você pode se surpreender ao saber que, com algumas modificações importantes, seu microscópio atual ainda pode ser capaz de atingir seus objetivos de pesquisa.

Junto com as atualizações discutidas na Parte 1 e Parte 2 de nossa série de aprimoramento de microscópio, adicionar uma câmara de controle ambiental ou gabinete pode ajudá-lo a alcançar os objetivos de pesquisa de imagem ao vivo que você pode pensar que não são viáveis.

A importância do controle ambiental para imagens de células vivas estáveis

A imagem de células vivas pode levar 20 minutos, várias horas ou até mais. Além da variação do foco Z associada às mudanças de temperatura ambiente em experimentos mais longos, você pode precisar controlar:

• Temperatura (até 37 °C [99 °F] ou até 22 °C [72 °F])
• Umidade
• CO₂ (e O₂ se as condições de hipóxia forem relevantes)

O controle ambiental do microscópio pode ser configurado para incluir um ou todos esses recursos, tornando-o uma atualização fácil para várias aplicações de imagem de células vivas e organismos modelo.

Os benefícios das unidades incubadoras de platina

Os sistemas de incubadoras de platina, como os da Tokai Hit e Okolab, oferecem unidades de câmara convenientemente removíveis. Isso permite adicionar e remover o controle ambiental conforme necessário. Isso é particularmente conveniente quando o instrumento também é usado para aplicações que não requerem imagens de células vivas.

Além disso, esses sistemas são altamente eficazes em manter a viabilidade por horas e até dias. As portas de perfusão permitem o reabastecimento de água e o meio para umidade e nutrientes/agonistas, e os aquecedores de solução em linha disponíveis minimizam o choque térmico.

Observe também que as objetivas de imersão atuam como dissipadores de calor quando em contato com sua amostra, portanto, você pode querer adicionar um aquecedor de objetiva se estiver usando essas ópticas.

Gabinetes de microscópio para imagens de células vivas

Outra opção é usar um gabinete de incubação completo para microscópio. Embora os gabinetes não possam ser facilmente removidos do microscópio, eles podem manter o controle ambiental dentro de um volume maior do que com uma incubadoras de platina.

Esses gabinetes são espaçosos o suficiente para acomodar plataformas de distribuição de fluidos e fornecer ambientes com temperatura estável. Isso é benéfico tanto para a amostra quanto para o microscópio, pois os ciclos frequentes de calor/resfriamento podem aumentar o desgaste dos componentes do microscópio. Muitos fabricantes oferecem um modelo tipo blecaute para manter um ambiente escuro dentro do gabinete, eliminando a necessidade de uma sala de microscópio separada.

Impacto das mudanças no ambiente de uma sala em imagens de lapso de tempo

É importante notar que a maioria dos sistemas de incubação para microscópio é calibrado para uma temperatura média de 25 °C (77 °F). Alguns sistemas monitoram a temperatura com precisão e fazem correções rápidas de temperatura. Mesmo assim, é melhor evitar colocar seu instrumento em áreas sujeitas a mudanças térmicas. Lembre-se de evitar colocar o instrumento sob saídas de ar, mas se isso for inevitável, use defletores para direcionar o fluxo de ar para longe do microscópio.

Finalmente, certifique-se de que o microscópio esteja localizado longe de instrumentos grandes, como centrífugas, geladeiras, freezers e portas usadas com frequência. Isso pode transmitir vibrações no seu experimento de imagem de série temporal. Uma mesa antivibração pneumática é útil para isolar seu instrumento, mas é melhor evitar o risco de qualquer interrupção vibratória em seu experimento de imagem.

Obtenha mais do seu microscópio

Quer mais dicas de aprimoramento do microscópio? Não se esqueça de ler a Parte 1 e a Parte 2 desta série para descobrir outras atualizações do sistema a serem consideradas para a obtenção de imagens eficazes de células vivas. Confira agora:

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