La tecnología de reproducción asistida (ART) hace referencia a procedimientos y tratamientos usados para tratar la infertilidad. Olympus ofrece diversos tipos de microscopios para permitir una amplia gama de aplicaciones en la tecnología de reproducción asistida, como:

• Estereomicroscopios para limpieza de ovocitos, congelación de ovocitos y observación de descongelación de embriones
• Microscopios verticales para la observación del esperma
• Microscopios verticales que asisten el flujo de trabajo de inyección de esperma intracitoplásmica (ICSI) y la inyección de esperma seleccionado morfológicamente intracitoplásmica (IMSI)

El ajuste adecuado de su microscopio para estas tareas puede mejorar la calidad de las imágenes observadas. Para respaldar su trabajo, esta nota de aplicación comparte los cinco ajustes básicos del microscopio para ayudar a optimizar el flujo de trabajo y las observaciones diarias. Tenga en cuenta que los procedimientos siguientes se centran en los estereomicroscopios y los microscopios invertidos más usados de Olympus.
 

1. Ajuste del eje óptico

Para ajustar el eje óptico en un microscopio invertido IX73 o IX83, siga estos pasos:

1. Mueva la palanca del diafragma del iris de apertura del condensador a la posición situada más a la izquierda para abrir el diafragma.
2. Mueva la palanca del diafragma del iris de campo del pilar de iluminación a la posición situada más a la izquierda para abrir el diafragma.
3. Enfoque la muestra usando la lente del objetivo 10X.
4. Mueva la palanca del diafragma del iris de campo ligeramente a la derecha para detener el diafragma del iris de campo de forma que la imagen esté en el campo de visión. (La Figura 2a muestra la visión a través del ocular).
5. Gire el mango del condensador que sube y baja el enfoque en la imagen del diafragma del iris de campo.
   Compruebe que puede ver el polígono de forma clara (Figura 2b).
6. Inserte los dos destornilladores hexagonales adjuntos en los orificios para los tornillos de ajuste. Gire el tornillo de centrado del condensador para moverlo hasta el centro del campo de visión (Figura 2c).
7. Abra la palanca del diafragma del iris de campo hasta que la imagen esté fuera del campo de visión.

El sistema CM20 nos permitió demostrar que era posible observar el proceso de cultivo de orgánulos de hígado en tres dimensiones que se diferencian y crecen en Matrigel.^*1

Figura 1: Microscopio IX73 con un condensador manual IX2-MLWCD

2. Ajuste de la distancia interpupilar

El ajuste de la distancia interpupilar modifica la anchura entre los oculares a la anchura de los ojos del observador para obtener una observación clara. El ajuste apropiado de la distancia interpupilar le permite ver una imagen clara a través de los oculares. Si mira a través del ocular y ve dos imágenes, será necesario ajustar la distancia interpupilar.

Para ajustar la distancia interpupilar en un microscopio invertido IX73 o IX83, o en un estereomicrosocpio SZX10 o SZX16, siga estos pasos:

1. Mire en el ocular en la posición correcta del punto ocular (Figura 3) mientras enfoca la vista en la muestra. Para observar de forma cómoda, los ojos deben estar a una distancia específica del ocular. Si lleva gafas, asegúrese de que toquen el vidrio de los oculares. Si no las utiliza, descanse los ojos en las copas oculares de caucho fijadas a los oculares.

   
   Figura 3

2. Reduzca o amplíe la anchura de los ojos del ocular derecho e izquierdo horizontalmente, de forma que el campo de visión izquierdo y derecho aparezcan como una imagen única en el centro. Acerque los ojos al ocular mientras observa una única imagen. Repita este ajuste de forma que los dos ojos, derecho e izquierdo, puedan ver el mismo campo de visión.

   
   Figura 4

3. Ajuste dióptrico

El ajuste dióptrico corrige la diferencia entre el campo de visión izquierdo y derecho, y reduce al mínimo el cambio del enfoque al cambiar la lente del objetivo. Dado que las dioptrías varían entre individuos, el ajuste de las dioptrías es necesario para cada persona.

Para ajustar las dioptrías en el microscopio invertido IX73 o IX83, siga estos pasos:

1. Ajuste la escala del anillo de ajuste de dioptrías a ambos lados en la posición "0".

   
   Figura 5

2. Inserte una lente de objetivo de magnificación baja (p. ej. 10X) en la trayectoria óptica. Mire en el ocular derecho con el ojo desnudo y enfoque en la muestra con el mango de movimiento grueso.
3. Inserte una lente del objetivo de magnificación baja (p. ej. 10X) en la trayectoria óptica otra vez. Mientras observa la muestra con el ojo derecho, gire el anillo de ajuste dióptrico en el lado derecho (lado del tubo de observación: la sección irregular en la Figura 6a) para enfocar la muestra.

   
   Figura 6

4. Mire en el ocular izquierdo con el ojo izquierdo y gire solo el anillo de ajuste dióptrico (Figura 6b) en el lado izquierdo (el lado del ocular) para enfocar la muestra.

4. Ajuste del collar de corrección en una lente del objetivo

Debido a la influencia de la superficie inferior de un contenedor de muestras, en la imagen observada puede aparecer aberración esférica (un error óptico en el que la luz no se recoge en un punto en el eje óptico). Esto podría hacer que la imagen aparezca borrosa. El papel del collar de corrección en una lente del objetivo es reducir esta aberración.

Figura 7

Los objetivos de Olympus se han diseñado ópticamente para un grosor de contenedor de 1,5 mm, que suele ser el grosor típico de un cubreobjetos. Esto significa que, cuando el collar de corrección del objetivo se ajusta a una posición de 1,5, el grosor inferior total de la placa térmica y el contenedor debe ser de 1,5 mm. Este grosor total le permite aprovechar al máximo las prestaciones de su objetivo.

Para satisfacer estos requisitos de grosor específicos, escoja una placa térmica que funcione con su contenedor de muestras. Para una placa de plástico con un grosor de 1 mm, escoja una placa térmica con un grosor de 0,5 mm. Para una placa con la parte inferior de vidrio y un grosor de 0,17 mm, escoja una placa térmica con un grosor de 1,3 mm.

También puede ajustar el collar de corrección de la lente del objetivo en función del grosor de la placa térmica y el grosor del contenedor combinados (si se utiliza un microscopio invertido IX73). A continuación, se proporcionarán dos ejemplos:

Ejemplo 1: Si la placa térmica tiene un grosor de 0,5 mm y la placa con la parte inferior de vidrio tiene un grosor de 0,17 mm, combine los grosores (0,5 + 0,17 mm = 0,67 mm) y ajuste el collar de corrección a la posición de 0,67 mm (Figura 8).

Figura 8

Ejemplo 2: Si la placa térmica tiene un grosor de 0,5 mm y la placa de plástico tiene un grosor de 1 mm, combine los grosores (0,5 + 1 mm = 1,5 mm) y ajuste el collar de corrección a la posición de 1,5 mm (Figura 9).

Figura 9

5. Ajuste parfocal del zoom

El ajuste parfocal del zoom previene problemas de borrosidad al cambiar entre magnificación baja y magnificación alta. Si este ajuste se realiza correctamente, no tendrá que ajustar el enfoque cada vez que cambie la magnificación durante trabajos como la limpieza de ovocitos. Esto puede mejorar la eficacia de trabajo.

Para ajustar el enfoque de zoom en un estereomicroscopio SZX10 o SZX16, haga lo siguiente:

1. Ajuste el mango del zoom al lado de magnificación mínima y enfoque con el mango de movimiento grueso.
2. Mueva gradualmente el mango del zoom al lado de magnificación máxima y enfoque con el mango de movimiento fino. Después eleve el mango a la magnificación máxima y enfoque.
3. Vuelva a colocar el mango del zoom en el lado de la magnificación más baja. Si la visión no está enfocada, gire el anillo de ajuste dióptrico al ocular derecho y al ocular izquierdo par enfocar.
4. De nuevo, ajuste el mango del zoom al lado de magnificación máxima y compruebe si la visión está enfocada. Si no está enfocada, repita los pasos dos y tres. El ajuste del enfoque del zoom se completará cuando las magnificaciones mínima y máxima estén enfocadas.
5. Ajuste la anchura del rojo para que los dos ojos puedan ver un único campo de visión.

   
   Figura 10